<<

стр. 2
(всего 20)

СОДЕРЖАНИЕ

>>

бенности приготовления контрольных материа-
21
фугируют для удаления слизи и незначительного Т а б л и ц а 6. Перечень веществ и их
количества солей мочевой кислоты. После такой концентрация в контрольных растворах
обработки моча становится прозрачной и почти
не имеет запаха. Полученный контрольный мате-
риал остается стабильным при комнатной темпе-
ратуре несколько лет.
Приготовление контрольных
материалов, имитирующих мо-
ч у. Раствор № 1: в мерную колбу вместимостью


сыворотки с нормальной концентрацией белка;
1 г глюкозы; 0,5 мл ацетона; 0,1 мл гемолизата
и вливают до метки дистиллированной воды.
Перемешивают до полного растворения. Полу-
ченный контрольный материал хранят при
—20 °С. Стабилен до 3 мес.
Для получения осадка все добавки промыва-
ют в холодном изотоническом растворе хлорида
натрия с формалином (0,85 г NaCl+10 мл
водного формалина и доводят до 100 мл дистил-
лированной водой). Фиксацию продолжают в те- Мочевой контроль для токсикологического
исследования. Мочевой контроль для токсиколо-
чение ночи, затем центрифугируют и добавляют
в контрольный материал. В качестве добавки гического исследования можно приготовить сле-
дующим образом.
для формирования осадка мочи используют сле-
1. Отбирают суточные пробы больных, не
дующие фиксированные вещества: эритроциты,
курящих и не принимающих лекарств, н собира-
лейкоциты светлого слоя кровяного сгустка, не-
патогенные Е. coli, клетки дрожжей, сперматозо- ют слив объемом до 10 л. Хранят при температу-
ре от 4 до 7 °С.
иды, кристаллы цистина (получают путем пере-
кристаллизации из чистого порошка L-цистина), 2. Фильтруют через стеклянную вату для
исключения посторонних примесей.
кристаллы трипельфосфатов (берут из проб
больных), кристаллы оксалата кальция (берут 3. Исследуют часть сливной мочи на наибо-
лее часто применяемые лекарства, которые опре-
из проб больных).
Раствор № 2: в мерную колбу вместимостью деляют в лаборатории. Слив используют в слу-
чае отрицательной реакции.
2 л вносят хлорид натрия, глюкозу, мочевину
4. К сливу мочи добавляют: морфина гидрох-
и ацетон в количествах, указанных в табл.
6. Приливают 500 мл воды, перемешивают. Мик- лорид, кодеина фосфат, хинина гидрохлорид,
ропипеткой вносят 0,2 мл цельной крови с вели- метадона гидрохлорид, глютетимид — по 20 мг
каждого и 30 мг амфетамина. Перед добавлени-
чиной гематокрита от 40 до 45. Для того чтобы
ем в слив глютетимида его нужно растворить
добавить 0,8 г сывороточного белка, используют
в 3 мл абсолютного этанола.
слитую сыворотку от больных или контрольную
5. Хорошо смешать и разлить по 10—15 мл
сыворотку с известным содержанием белка. Не-
в пузырьки. Хранить при —20 °С. Такие сливы
стабильны 8 мес.
6. Для использования в качестве контрольно-
го материала содержимое пузырька оттаивают
и исследуют вместе с неизвестными образцами
мочи.
Контроль качества гематологических иссле-
дований. Для контроля качества определений
гемоглобина применяются следующие компонен-
сыворотке.
ты:
Если используемая сыворотка содержит 7,5 г
белка, то объем сыворотки, содержащий 0,8 г 1. Стандартный раствор гемоглобина с изве-
стной концентрацией.
белка, будет равен:
2. Стерильный раствор гемолизата (консер-
вированная кровь). Для приготовления кон-
трольного раствора необходимо осуществить
следующее:
а) отцентрифугировать 200 мл цитратной
крови для осаждения клеток, удалить суперна-
Затем приливают дистиллированную воду до
метки и хорошо перемешивают. Для консерва- тантную плазму;
ции в раствор добавляют 5 мл хлороформа. б) добавить 100 мл дистиллированной сте-
Хлороформ является хорошим консервантом рильной воды и встряхивать смесь на механиче-
ской мешалке около 30 мин;
для этих контрольных растворов. Другие консер-
ванты могут интерферировать в одной или в не- в) поставить полученный раствор в глубокую
заморозку (не ниже —20 °С) на ночь;
скольких реакциях.
г) на следующий день оттаять;
Срок годности раствора — около года.
22
д) снова хорошо перемешать на мешалке Среднеквадратическое отклонение лаборатории,
30 мин; рассчитанное контрольным центром, можно рас-
е) слить раствор через фильтр Millipore сматривать как отражение способности лабо-
в стерильный сосуд; ранта производить правильные анализы. Это
ж) разлить по 1 мл в стерильные пузырьки особенно верно, когда рассчитывают среднюю
и заморозить при — 20 °С. арифметическую всех среднеквадратических от-
В целом вся процедура приготовления дол- клонений для всех тестов. Эта средняя арифме-
жна проводиться в стерильных условиях. Сте- тическая может быть названа как комбиниро-
рильный раствор гемолизата стабилен около ванное Среднеквадратическое отклонение (KS).
года. Раствор используют для контроля воспро- Величину KS рассчитывают за определенный
изводимости исследований гемоглобина. отрезок времени (полгода, год) для каждого
3. Консервированная кровь с фиксированны- лаборанта и дают грубую оценку аналитической
ми клетками крови или раствор с искусственны- способности каждого.
ми частицами, имитирующими клетки крови Лаборатории фиксируют результаты анали-
(для контроля качества подсчета клеток крови). зов контрольных материалов за определенный
4. Контрольные мазки (окрашенные и не- промежуток времени, идентифицируя каждый
окрашенные) с нормальной и патологической тест с именем лаборанта, который выполнял
лейкоцитарной формулой (для контроля каче- тест. После истечения установленного срока
ства подсчета лейкоцитарной формулы). приготовляют оценочные листы для каждого
Мазки многократно просчитываются квали- лаборанта, как показано в табл. 7.
фицированными специалистами (не менее
20 раз). Из полученных данных рассчитывают Т а б л и ц а 7. Результаты исследования
статистические критерии определения точности контрольной сыворотки лаборантом А за 1 год
подсчета мазка. Для удлинения срока хранения
мазков используют клей БФ-6, который облада-
ет свойством образовывать тонкую прозрачную
пленку, герметически приклеивающуюся к по-
верхности мазка и стекла и предохраняющую
препарат от внешних воздействий. Предложена
методика приготовления мазков на отмытой рен-
тгеновской пленке, нарезанной по размеру пред-
метного стекла. Мазки, приготовленные таким
образом, можно пересылать в конверте, что весь-
ма удобно при проведении межлабораторного
контроля качества подсчета лейкоцитарной фор-
мулы.

1.5.4. Контроль качества
Комбинированное Среднеквадратическое от-
работы лаборантов
клонение за год составляет 0,52. На оценочном
листе регистрируют название теста, выполняе-
Оценка качества работы лаборантов должна
мого лаборантом, полученный им результат,
быть частью программы внутрилабораторного
истинное значение и Среднеквадратическое от-
контроля качества. Могут быть использованы
клонение, сообщаемое контрольным центром. Из
следующие методы: 1) метод, использующий
этих величин рассчитывают разницу между
результаты межлабораторного контроля каче-
ства; 2) метод дублированных анализов; 3) ме- истинной величиной и полученной лаборантом
и делят на Среднеквадратическое отклонение.
тод случайных проб; 4) метод разведения; 5) ме-
Затем рассчитывают комбинированное средне-
тод, использующий результаты внутрнлабора-
квадратическое отклонение, которое является
торного контроля качества.
средней всех среднеквадратических отклонений.
Методы перечислены в порядке возрастания
Как видно из табл. 7, лаборант А в первой пробе
времени, затрачиваемого на каждый метод заве-
для натрия получил результат 132 ммоль/л.
дующим лабораторией. Методы 1 и 2 можно
использовать почти во всех лабораториях без Средняя величина, сообщенная контрольным
особых трудностей и больших расходов. центром, равна 132,7 ммоль/л. Среднеквадрати-
Лаборатории, участвующие в межлабора- ческое отклонение среди участников контроля —
торных экспериментах по контролю качества 1,7 ммоль/л. Чтобы рассчитать 5 лаборанта А,
исследований, могут использовать результаты нужно решить следующее уравнение:
контроля для оценки работы лаборантов. Метод
132-132,7
зависит от расчета правильности всех определе- = -0,4.
ний, выполненных лаборантами в контрольном 1,7
материале в течение определенного промежутка
времени. Нельзя делать выводы о качестве рабо- Число, полученное в последнем столбце, показы-
ты лаборанта на основании одного анализа. вает, что величина, полученная лаборантом А,
Однако если лаборант выполнил 10 или 20 ана- на 0,4 единицы S меньше истинной величины
лизов, то есть возможность оценить работу (если допустить, что средняя контроля есть
лаборанта на основании аналитических резуль- истинная величина). Отрицательные знаки в по-
татов, если истинная величина проб известна. следнем столбце игнорируют.
23
Величина KS указывает на способность ла- Метод случайной пробы похож на предыду-
щий. Вместо анализа всех проб в дубликате
боранта выполнить лабораторные исследования
каждый лаборант анализирует одну или две
с хорошей точностью. Чем ниже величина KS,
пробы в дубликате за неделю. Эти пробы выби-
тем лучше работа лаборанта. Величину K.S мож-
раются случайно заведующим лабораторией,
но использовать для ранжирования лаборантов
без ведома лаборанта. Результаты дублирован-
по качеству работы. Величину KS от 0 до
ных анализов, выполняемые каждым лаборан-
0,5 можно считать очень хорошей, от 0,5 до 1 —
хорошей, от 1 до 1,5 — допустимой, от 1,5 до 2 — том, заносят в таблицу за определенный проме-
жуток времени, после чего для каждого лабо-
плохой и выше 2 — очень плохой.
Первым требованием для применения метода ранта рассчитывают среднеквадратическое от-
клонение, значения которых заносят в таблицу
является обязательное участие лаборатории во
против каждого лаборанта. Оценка техники ис-
всех программах межлабораторного контроля
следования такая же, как в предыдущем методе.
качества, чтобы каждый лаборант имел возмож-
В небольших лабораториях, где исследуют
ность выполнить не менее 10 тестов в контроль-
менее 10 проб на один тест, трудно выбрать
ной сыворотке за год. Во-вторых, этот метод
менее перспективен в полностью автоматизиро- случайную пробу без ведома лаборанта. В таких
случаях используют метод разведения, который
ванных лабораториях. В-третьих, заведующий
состоит из выбора случайной пробы и разведе-
лабораторией должен гарантировать качество
ния ее водой или нормальным изотоническим
оборудования и реактивов. Чтобы использовать
раствором хлорида натрия. Лучше растворять
этот метод, лаборатория должна внедрить про-
пробу не более чем на 20%. Пробы, приготов-
грамму контроля качества исследований внутри
ленные таким образом, под вымышленным име-
своей лаборатории. При ранжировании лабо-
нем передают лаборанту для исследования. Ре-
рантов нужно, чтобы число исследуемых тестов,
зультаты заносят в таблицу, как в методе слу-
выполняемых лаборантами, было равнознач-
чайных проб, рассчитывают среднеквадратиче-
ным.
ское отклонение в целях оценки качества работы
Для сравнения качества работы лаборантов
лаборантов и затем высчитывают разницу меж-
можно использовать результаты дублированных
ду полученной и ожидаемой величиной для
анализов. Принцип метода состоит в следую-
разведенной сыворотки.
щем: разница между результатами дублиро-
Другой вариант того же метода — использо-
ванных анализов обратно пропорциональна ка-
вание двух проб сыворотки больных, смешанных
честву выполнения лаборантом исследований.
1:1. Для расчета среднеквадратического откло-
Лучшие лаборанты получают, как правило, не-
нения используют разницу между расчетной
большую разницу между результатами дублиро-
и аналитической величиной. Для смешивания
ванных анализов, тогда как менее старательные
и разведения может быть также использована
получают большую разницу.
ежедневная контрольная сыворотка.
Результаты исследования контрольной сыво-
ротки с известным содержанием компонентов,
проводимого в соответствии с программой внут-
рилабораторного контроля качества исследова-
ний, можно собрать за определенный отрезок
времени и таким же образом, как и результаты
межлабораторного контроля, использовать как
способ оценки качества работы лаборантов.
В паспорте к сыворотке содержится средняя
величина и среднеквадратическое отклонение.
После исследования этой сыворотки в лаборато-
рии можно рассчитать величину S для лабо-
где d — разница между результатами дублиро- ранта, используя S Из паспорта.
ванных анализов; п — число анализируемых Например, лаборант при исследовании холе-
проб; 2n — общее число анализов. стерина в сыворотке получил результат
Рассчитанное среднеквадратическое откло- 4,7 ммоль/л. В паспорте к сыворотке даны следу-
нение характеризует аналитическую ошибку, ющие значения: X = 4,8 ммоль/л, 5=0,13
присущую самому методу исследования, и ошиб- ммоль/л при использовании того же метода.
ку лаборанта. Когда величина аналитической Разница между полученным и паспортным зна-
ошибки постоянна, вариации, обнаруживаемые чением составит: 4,8—4,7=0,1 ммоль/л.
в величине среднеквадратнческого отклонения,
полученные разными лаборантами, будут полу-
чаться вследствие вариации в ошибке лабо-
ранта. Другими словами, величина среднеквад-
ратического отклонения обратно пропорцио-
нальна квалификации лаборанта.
Этот метод оценки можно использовать толь- Из среднеквадратических отклонений, вы-
ко для сравнения качества работы лаборантов, считанных за определенный промежуток време-
но нельзя использовать для ранжирования, так ни, рассчитывают KS, которые затем можно
использовать для ранжирования и оценки каче-
как невозможно точно сказать, какое средне-
ства работы лаборантов.
квадратическое отклонение лучше.
24
1.6. ХАРАКТЕРИСТИКА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ
ПРИНЦИПОВ МЕТОДОВ И АППАРАТУРЫ
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЙ

для непрерывного измерения различных пара-
Подавляющее большинство результатов ла-
метров внутренней среды — pO2, глюкозы, мо-
бораторных анализов получают с помощью той
лочной кислоты и т. д., в которых используются
или иной аппаратуры, чаще всего микроскопов
принципы потенциометрии и амперметрии.
и фотометров (другие приборы используются
В каждом, или почти в каждом, лабора-
реже). Органолептические методы, для выполне-
торном измерительном приборе имеются приспо-
ния которых не требуется никаких приборов
и аппаратов, имеют лишь вспомогательное зна- собления и устройства, облегчающие работу
лаборанта, однако в некоторых они настолько
чение. Чтобы грамотно применять эту сложную
совершенны, что функция аналитика сведена
медицинскую технику, нужно знать не только
к минимуму, все остальное выполняется автома-
практические приемы, что легко постигается в
тически. Такие приборы называются автомати-
процессе работы, но и физические принципы
ческими анализаторами; они бывают двух типов:
измерений, так как они определяют оптимальные
непрерывные, когда все пробы обрабатываются
диапазоны измеряемых величин, возможные по-
грешности и способы борьбы с ними, правила последовательно, как на конвейере, и дискретные,
когда одновременно обрабатывается серия из
контроля за технической стороной измерений
определенного количества проб, причем следую-
и т.д.
щую серию можно анализировать только тогда,
По способу использования все лабораторное
когда анализ окончен. Работа автоматического
оборудование делится на измерительные прибо-
анализатора управляется процессором — спе-
ры, которые выдают количественные результаты
циальной вычислительной машиной; результаты
и поэтому подлежат метрологическому контро-
работы автоматического анализатора сравни-
лю, и прочую, иногда очень сложную, аппарату-
тельно легко могут быть переданы цифровой
ру, которая метрологический контроль не прохо-
дит, например микроскопы. Ниже приводится вычислительной машине, поэтому автоматиза-
ция работы неизбежно ведет к насыщению клини-
описание физических принципов работы и
ческих лабораторий вычислительной техникой
устройства некоторых наиболее распространен-,
К числу измерительных приборов должны
ных лабораторных измерительных приборов.
быть отнесены и более сложные устройства,
В клинической лабораторной диагностике
в которых объединены две функции: разделения
чаще всего используются оптические измери-
веществ и определения их количества в различ-
тельные приборы. К ним относятся приборы для
измерения светопоглощения — фотометры и ных фракциях. Это приборы для электрофореза
спектрофотометры; для измерения окраски и и различные хроматографы. Поскольку эти при-
светопропускания пленок — денситометры; для боры чаще всего используются в научной работе,
измерения флюоресценции — флюорометры, в настоящем разделе они не рассматриваются,
спектрофлюорометры, поляризационные флюо- так же как не рассматривается другой очень
рометры; для измерения интенсивности свето- важный класс аналитической аппаратуры — ве-
излучения (окраски пламени, эмиссии) — пла- сы, поскольку взвешивание используется в лабо-
менные фотометры; для измерения количества раториях почти исключительно для приготовле-
излученного света — люминометры; для измере- ния растворов, а не для анализа состава биоло-
ния поглощения света раскаленными газами — гических жидкостей, как это делается в весовом
атомные абсорбциометры; для измерения свето- анализе.
Ниже приводятся сведения, которые должны
рассеивания — нефелометры.
знать лабораторные работники, чтобы успешно
Другую группу составляют приборы для
электрохимических измерений — потенциомет- заниматься фотометрией (в том числе спектро-
ры, полярографы и т. д. По установившейся фотометрией), флюорометрией и потенциомет-
традиции прибор для измерения электрического рией (практически измерением рН). Некоторые
потенциала при минимальном значении текуще- вопросы, касающиеся других методов измере-
го тока называется потенциометром, а метод — ний, рассмотрены в соответствующих разделах.
потенциометрией. Если же измеряется сила тока
при постоянном значении электрического напря-
1.6.1. Фотометрия
жения — это амперметрия, если в процессе из-
и фотометрическая аппаратура
мерения величина потенциала изменяется по
тому или иному закону, такой метод называется
вольтамперметрней или полярографией, измере- Биохимические аналитические методы чаще
ние же количества электричества называется всего оканчиваются цветной реакцией, в резуль-
кулонометрией. Из электрохимических приборов тате которой прозрачный раствор приобретает
непременной принадлежностью почти каждой окраску, т. е. способность избирательно погло-
лаборатории крупной больницы являются рН- щать (абсорбировать) свет с определенной дли-
метры и их разновидности — приборы для изме- ной волны. Разумеется, что тот свет, который не
рения показателей кислотно-щелочного состоя- поглотился, проходит через раствор, поэтому
субъективно воспринимаемая окраска является
ния (АЗИВ, прибор Аструпа и т. д.). К ним же
примыкает быстрорастущая группа датчиков дополнительным цветом относительно того, ко-

25
торый поглотился. Так, если интенсивно погло-
щается красный свет, то раствор бывает зеле-
ным или синим, если поглощается фиолетовый
свет, раствор желтый и т. д. График, изобра-
жающий поглощение света с разными длинами
волн, называется спектральной кривой; обычно
для фотометрии используют область, где погло-
щение света наибольшее, т. е. максимум спект-
ральной кривой. Форма кривой, количество
видно из этих формул, ни количество прошедше-
максимумов на ней и их положение могут очень
го света, ни количество поглощенного света, ни
варьировать, но обычно в видимой области не
доля поглощенного света относительно падаю-
бывает больше одного-двух максимумов, поэто-
щего непропорциональны концентрации иссле-
му выбрать участок спектра, наиболее подходя-
дуемого раствора. Она прямо пропорциональна
щий для измерения, несложно.
логарифму отношений прошедшего через раст-
Для аналитических целей пригодны только те
цветные реакции, в которых развивается окра- вор и падающего света:
ска, пропорциональная концентрации исследуе-
мого вещества. В этом случае посредством фото-
метрии измеряется количество поглощаемого
Величина Е называется экстинкцией, или опти-
света и по этим данным рассчитывается искомая
концентрация. Однако количественные резуль- ческой плотностью раствора; большинство фото-
метрических приборов устроено так, что они
таты удается получать лишь в определенном
диапазоне концентраций, про который говорят, непосредственно указывают эту величину. Как
что в нем соблюдается закон Ламберта-Бера. правило, имеется возможность отсчитывать ре-
Если в растворе имеются непрозрачные зультаты и по другой шкале — в процентах
поглощенного или прошедшего света относи-
частицы, рассеивающие свет, он выглядит мут-
тельно фоновых величин. На широко распро-
ным. В этом случае, строго говоря, фотометрия
невозможна, так как трудно узнать, сколько страненном фотометре ФЭК шкала оптических
плотностей нанесена красной краской, а шкала
света поглотилось, а сколько рассеялось. Суще-
процентов пропускания — черной (в просторе-
ствуют разные способы уменьшить ошибку, вы-
званную мутностью, но все они эффективны чии так и указывают: "отсчет по красной шка-
лишь в известной мере. В то же время рассеива- ле», имея в виду шкалу оптических плотностей).
ние света может быть использовано для опреде- Если оптическая плотность 1, это значит, что
ления количества рассеивающих частиц, а так- через раствор прошло только 10 % света, а
остальные 90 % поглотились в нем. Для боль-
же их размеров; такой анализ называется
шинства приборов высокого класса это крайняя
нефелометрией, или турбидиметрией.
величина, выше которой уже трудно получить
Закон поглощения света окрашенными
надежные результаты, но для обычных лабора-
растворами (Ламберта-Бера). Между концен-
торных приборов она находится вне диапазона
трацией окрашенного вещества в растворе, тол-
достоверных данных. Во всех предназначенных
щиной раствора и долей света, которая в этом
для измерения оптической плотности приборах
растворе поглощается, существует сложная ло-
наибольшая точность достигается при значени-
гарифмическая зависимость:
ях экстинкцин около 0,3 (т. е. когда проходит
примерно половина падающего света); по мере
удаления в ту и другую сторону точность измере-
ния, а следовательно, и достоверность результа-
раствор (т. е. то его количество, которое улавли- тов уменьшаются.
Экстинкция раствора, т. е. величина оптиче-
вается приемником света); /0 — количество све-
ской плотности, есть произведение концентрации
та, падающего на раствор (т. е. величина холо-
на толщину слоя раствора. Поэтому не имеет
стого опыта, когда окрашенного вещества нет,
значения, фотометрируется данный раствор в
но все остальные потерн остаются); с — концен-
кювете с длиной оптического .пути 1 см или тот
трация; / — толщина слоя; k — характеристика
поглощающего вещества — так называемый ко- же раствор, разведенный в два раза, но в кювете
эффициент экстинкции, или коэффициент опти- с длиной оптического пути 2 см и т. д. Удлинение
оптического пути приводит к повышению чув-
ческой плотности. Если толщина слоя выражена
в сантиметрах, а концентрация в молях в 1 см3, ствительности лишь в том случае, если объем
то коэффициент k имеет размерность см 2 /моль раствора остается прежним и сокращается попе-
речное сечение кюветы. Но возможности тут
(в результате перемножения всех трех величин
ограничены, так как чем уже и длиннее кювета,
должен получиться безразмерный параметр);
тем большие требования предъявляются к фоку-
эта величина называется молярным коэффици-
ентом экстинкции и соответствует количеству сировке и юстировке пучка света. Поэтому боль-
молей (или его долей) вещества, находящегося шинство биохимических методик рассчитано
в 1 с м 2 светового потока. Заметим, что эта так, чтобы фотометрия проводилась в кювете
величина в 1000 раз меньше той, которая полу- с длиной оптического пути I см; значительно
реже используются кюветы с длиной оптическо-
чится, если использовать более привычные раз-
го пути 0,5 см, а кюветы с длиной оптического
мерности, т. е. выражать концентрацию в молях
пути 2 см — практически никогда.
в 1 л, а длину кюветы в сантиметрах:
26
В литературе имеется много описаний раз- нужны кюветы из специальных сортов стекла —
личных микросистем, в которых повышение чув- так называемые увиолевые; в коротковолновой
ультрафиолетовой области пригодны только кю-
ствительности фотометрии достигается путем
использования узких и длинных кювет и значи- веты из кварца и сапфира. По внешнему виду
они плохо различимы, поэтому узнать, из какого
тельного сокращения объема фотометрируемого
раствора. Но надо иметь в виду, что если объем материала изготовлена кювета, можно только
раствора меньше 0,5 мл, точность отмеривания после определения диапазона длин волн, кото-
падает, возрастают ошибки в результате испаре- рые она пропускает. .При получении новых пар-
ния растворов в ходе анализа и т. д., поэтому тий кювет, или если их почему-либо перепута-
надо принимать специальные меры предосто- ли, надо измерить оптические плотности кювет,
рожности. Опыт работы показывает, что опти- заполненных водой, по отношению к пустому
мальными в смысле чувствительности, точности кюветодержателю через каждые 20 им, начиная
и удобства работы оказываются объемы 0,5— от 400 нм, в сторону коротких волн до конца
1 мл при длине оптического пути кюветы шкалы прибора. Практически можно работать
I см. Эти параметры и реализованы в большин- на данной длине волны, если оптическая плот-
стве современных прецизионных приборов. ность кюветы не более 0,2—0,3. В связи с тем что
Точность фотометрии значительно возраста- кюветы из кварца или сапфира очень дороги,
надо стремиться работать в видимой области
ет, если нет необходимости каждый раз выни-
мать кювету для заполнения ее новой порцией только со стеклянными кюветами, а в ближней
исследуемого раствора. Существуют различные ультрафиолетовой области — только с увиоле-
конструкции проточных кювет, из которых ис- выми.
следуемый раствор отсасывают после окончания Последовательность операций при работе на
измерения и заполняют кювету новой порцией, спектрофотометрах или фотометрах различных
конструкций несколько различается, но принцип
не вынимая ее из гнезда прибора. Выполнять
остается одним. Сначала устанавливают длину
серийные анализы на таких приборах проще
волны, выбирая светофильтр на фотометре или
и быстрее, чем при использовании съемных кю-
вращая соответствующую рукоятку на спектро-
вет. Но надо помнить, что количество раство-
фотометре. Чтобы точно и правильно установить
ра должно быть достаточным, чтобы промыть
кювету. длину волны, надо идти от меньших длин к боль-
Фотометрические приборы делятся на две шим, так как прн движении в обратном на-
большие группы: фотометры и спектрофотомет- правлении ошибка возрастает. Следующий этап
ры. В фотометрах нужные спектральные диапа- измерения — установка нуля, т. е. определение
величины Iо в формуле 1 . Для этого в кювето-
зоны выделяются при помощи светофильтров,
держателе устанавливают кювету, заполненную
поэтому число участков спектра, в котором мо-
растворителем или раствором, полученным в ре-
жет проводиться измерение, равно числу свето-
зультате холостого опыта; изменяя ширину ще-
фильтров. В спектрофотометре участки спектра
выделяются при помощи призм или дифракци- ли, добиваются того, чтобы показания прибора
онных решеток, поэтому можно установить лю- соответствовали величине, предусмотренной ин-
струкцией (обычно это нуль), после чего холо-
бую длину волны в заданном диапазоне. Обычно
стую пробу заменяют опытной и производят
спектрофотометры — это приборы более высоко-
отсчет величины оптической плотности.
го класса, чем фотометры, в них можно выделить
Щелью спектрофотометра выделяется опре-
более узкий (более монохроматический) участок
деленный интервал длин волн: чем шире щель,
спектра, однако все зависит от конкретной кон-
тем шире и спектральный интервал. Если изме-
струкции прибора. Так, например, спектрофото-
метр «Спекол» фирмы «Цейс» (ГДР) хотя и по- рение делается в той области, где чувствитель-
зволяет делать измерения на любой длине волны ность прибора или прозрачность кювет мала,
чтобы вывести прибор на нуль, необходимо уве-
в диапазоне от 400 до 700 нм, но имеет настолько
слабый монохроматор, что более узкие области личить ширину щели. Это чревато возможно-
выделять труднее, чем на хорошем фильтровом стью такой ошибки, когда свет проходит с длина-
фотометре. ми волн, соседними с выбранной. Если исследуе-
мый объект для них прозрачен, то результаты
Чаще всего в клинической биохимии фото-
измерений оказываются ошибочными, так как
метрия проводится в области 400—700 нм — это
фактически регистрируется сила света не на
Так называемая видимая область спектра. Свет
избранной длине волны, а на соседней.
с большей длиной волны относится к ближней
Чтобы уменьшить ошибки, вызванные при-
инфракрасной области, измерения в которой
сутствием в растворе посторонних окрашенных
приходится делать чрезвычайно редко. Свет с
веществ или его мутностью, используют двух-
длиной волны короче 400 нм относится к ультра-
или трехволновые методы измерений. Сущность
фиолетовому диапазону, причем различают
трехволнового метода видна на рис. 2; оптиче-
ближнюю область с длиной волны 300—400 нм
скую плотность измеряют при трех длинах волн;
и коротковолновый диапазон 220—300 нм. Осо-
на месте максимума пропускания и на равном
бенно широко распространено определение вос-
расстоянии от него в сторону длинных и корот-
становленного NADH и NADPH по поглощению
ких волн. При этом предполагается, что рассеи
света с длиной волны 340 нм, т. е. в ближнем
ультрафиолетовом диапазоне. Для фотометри-
ческих измерений в видимой и ближней инфрак-
расной области пригодны кюветы из обычного
1
стекла; для ближней ультрафиолетовой области См. с. 26.

27
правило, что флюорометрни должны подвер-
гаться относительно разбавленные растворы.
При флюорометрии длина волны вторичного
излучения обычно устанавливается на максиму-
ме интенсивности, так как это излучение ма-
лоспецифично, в то время как длина волны
первичного света (возбуждения флюоресцен-
ции) должна приходиться на наиболее специ-
фичный для исследуемого вещества участок
спектра, который необязательно совпадает с
максимумом (мешающие вещества могут быть
причиной ложного максимума).
Физический эффект флюоресценции заклю-
Рис. 2. Введение поправки на неспецифическое чается в том, что молекула исследуемого веще-
поглощение (трехволновый метод). На оси ства поглощает квант света возбуждения и при
ордииат — величины светопоглощения (Е); на этом переходит в новое, энергетически более
оси абсцисс — длина волны света. богатое состояние; через некоторый микропро-
межуток времени она излучает избыточную
— величина светопоглощения. характеризую-
щая количество определяемого вещества; Е1, Е2, энергию в виде кванта света флюоресценции
Ез— светопоглошение при волнах разной длины. (эмиссии). В связи с тем что энергия кванта
света обратно пропорциональна длине волны,
длина волны возбуждающего света всегда коро-
че излучаемого. Промежуток времени между
ванне света или неспецифическая окраска рав-
поглощением света и его излучением очень мал,
номерно изменяется с изменением длины волны,
и в обычных флюоресцентных методах на него не
поэтому истинную оптическую плотность вычис-
обращают внимания, но он достаточен, чтобы на
ляют по формуле:
молекулярном уровне успели произойти некото-
рые события, в частности, чтобы молекула могла
изменить свое положение в пространстве. На
этом основан метод молекулярной вискозимет-
рии путем измерения поляризации света флюо-
ресценции.
1.6.2. Флюорометрия
Эффект флюоресценции заключается в том,
1.6.3. Пламенная фотометрия
что исследуемый объект светится под влиянием
и атомная абсорбцнометрия
облучения светом с более короткой длиной во-
лны. Излучаемый свет называется светом флюо-
ресценции, или вторичным излучением; тот свет, Соли металлов, попадая в пламя, способны
которым объект облучается, называется светом окрашивать его. Это происходит потому, что при
возбуждения флюоресценции, или первичным. высокой температуре пламени молекулы распа-
Форма спектра флюоресценции обычно зеркаль- даются на отдельные ионы, электроны которых
но отображает форму спектра возбуждения, при непрерывно переходят из одного квантового со-
этом спектр возбуждения флюоресценции бли- стояния в другое, что сопряжено с испусканием
зок к спектру поглощения раствора и поэтому или поглощением кванта света. Минимальная
характерен для данного флюорофора, в то время температура, необходимая для того, чтобы эти
как спектр флюоресценции малоспецифичен. процессы проходили достаточно интенсивно, за-
Аналитические методы, использующие флюорес- висит от природы исследуемого элемента и в
ценцию, основаны на предположении, что при меньшей степени от того, в состав какого соеди-
освещении светом одинаковой интенсивности си- нения в растворе оно входит. Некоторые эле-
ла света флюоресценции пропорциональна со- менты, например калий и натрий, начинают
держанию исследуемого вещества. Однако та- интенсивно излучать свет, попадая в сравни-
кая пропорциональность имеется только в отно- тельно низкотемпературное пламя, которое по-
сительно узком диапазоне концентраций, из лучается при сгорании метана в воздухе (так
которого на практике очень легко выйти, поэто- называемое метаново-воздушное пламя); дру-
му при налаживании флюорометрических иссле- гие же, как, например, кальций, начинают интен-
дований надо всегда с особой тщательностью сивно излучать свет и поглощать его лишь при
проверять линейность калибровочного графика значительно более высокой температуре, кото-
во всем диапазоне возможных величин. Наруше- рая создается при сгорании ацетилена. При
ние линейности бывает вызвано в первую оче- сгорании метана (т. е. бытового газа) на возду-
редь явлением гашения флюоресценции, которое хе можво определять кальций лишь после его
обусловлено тем, что по мере углубления пучка предварительного выделения, но методика эта
возбуждающего света в раствор интенсивность сложна, ненадежна и практически не использу-
его уменьшается вследствие поглощения. Чем ется.
концентрированнее раствор, тем поглощение это Метод, в котором изучается окраска пламе-
больше, поэтому сила возбуждающего света ни, т. е. излучение, возникающее в результате
оказывается также уменьшенной. Отсюда общее перехода атома из энергетически более высокого

28
состояния в низкое, называется пламенной фото- Как при фотометрии пламени, так и при
метрией. Можно изучать и обратный процесс, атомной абсорбции важнейшим этапом анализа
т. е. измерять поглощение света при переходе является распыление исследуемого раствора и
атома с более низкого на более высокий энерге- введение его в пламя горелки. Для этого исполь-
тический уровень; этот метод называется атом- зуют различные эжекторы из стекла или металла
ной абсорбциометрией. (аналогичные пульверизаторам), в которых
Аппаратура, необходимая для пламенной струя воздуха засасывает через узкую трубку
фотометрии, относительно проста и дешева, но исследуемый раствор и распыляет его в неболь-
метод оправдывает себя лишь при исследовании шом объеме, через который проходит струя
наиболее легковозбудимых щелочных элемен- воздуха (или кислородно-воздушной смеси),
тов — лития, натрия, калия, так как можно предназначенная для поддержания горения.
работать с легкодоступным низкотемператур- При этом в пламя попадает только очень неболь-
ным пламенем, которое образуется при сгорании шая часть распыленного раствора, а остальной
бытового газа. Химические методы определения раствор стекает на дно распылителя. Интенсив-
этих элементов сложны и неточны, поэтому ка- ность распыления, а следовательно, и количе-
лин и натрий определяют в клинических лабора- ство вещества, поступающего в пламя, зависят
ториях практически только путем фотометрии не только от условий работы эжектора — его
пламени. регулировки и давления воздуха, которое, ко-
При атомной абсорбциометрии исследуемый нечно, должно тщательно регулироваться и под-
образец вносят в пламя, в результате чего оно держиваться постоянным на протяжении всего
начинает поглощать свет с длиной волны, ха- измерения, но и от вязкости раствора. Возбуж-
рактерной для данного элемента. Особенность дение атомов в пламени в известной мере зави-
этого процесса состоит в том, что поглощается сит от природы молекулы, в .которую входит
очень узкая полоса света, измеряемая долями исследуемый элемент, а также от присутствия
нанометра, поэтому для измерения поглощения в пламени других элементов, т. е. фона. Поэтому
необходим соответствующий линейчатый источ- все условия проведения анализа должны тща-
ник света. В качестве такого источника служит тельно соблюдаться; при исследовании сыво-
специальная лампа, внутри баллона которой ротки крови или других богатых белком жидко-
находятся разогретые пары того самого элемен- стей разведение должно быть всегда одним и тем
та, концентрация которого определяется. Благо- же. Не следует думать, что если имеется пропор-
даря этому источник света излучает только тот циональность между концентрацией калиброво-
свет, поглощение которого должно быть иссле- чного раствора и показаниями прибора, то такая
довано; этим достигается очень высокая избира- же пропорциональность сохранится и при раз-
тельность физического эффекта и специфич- личных разведениях сыворотки, поскольку при
ность метода, однако для каждого исследуемого разведении сыворотки изменяются также вяз-
элемента должна быть специальная лампа, из- кость раствора, а значит, и условия распыления.
лучающая нужные линии спектра. Поэтому при- В составе пламенного фотометра обязатель-
боры для атомного абсорбционного анализа но имеется блок, обеспечивающий подачу возду-
выпускаются с набором ламп, число которых ха (или, реже, кислородно-воздушной смеси)
равно числу элементов, которые можно опреде- при постоянном давлении, которое регулируется
лять на данном приборе. в пределах 2—4 атм, а также горючего газа при
давлении, измеряемом сантиметрами ртутного
В некоторых приборах используется обычная
столба. Воздух подается в распылитель, оттуда
газовая горелка, в пламя которой распыляется
раствор, содержащий исследуемый элемент. Ре- в смеситель и в горелку. Свет, излучаемый го-
же для получения раскаленных паров исследуе- релкой, через систему зеркал, линз и светофиль-
мого вещества используется специальная графи- тров попадает на один или два фотоэлемента,
товая камера, стенки которой нагреваются элек- ток которых измеряется прибором. Устройство
тричеством, а во внутреннее пространство прибора обязательно предусматривает возмож-
ность визуального контроля пламени и его юсти-
распыляется раствор исследуемого образца. Та-
кая система сложнее, чем обычная горелка, но ровки. При налаживании прибора и включении
позволяет изменять температуру поглощающих его надо сначала создавать давление воздуха,
свет паров исследуемого элемента. Необходи- а потом уже включать газ и зажигать пламя, так
мость устанавливать для каждого исследуемого как в противном случае газ может проникнуть
элемента свой источник освещения конструктив- через смеситель в распылитель, где образуется
взрывоопасная газовоздушная смесь. В прибо-
но осложняет прибор, так как путем простого
ре также обязательно имеется отстойник, в кото-
поворота головки можно менять 3—4 лампы,
рый стекает жидкость, оседающая на дно распы-
а если число измеряемых элементов достигает
15—20, каждую лампу приходится отдельно лителя во время работы. Давление воздуха
устанавливать и юстировать. Атомные абсорб- в отстойнике во время работы всегда несколько
циометры — значительно более дорогие прибо- выше атмосферного, поэтому жидкость оттуда
ры по сравнению с пламенными фотометрами. удаляется через водяной запор. Во время рабо-
Многие элементы, которые определяются с их ты пространство внутри отстойника не должно
помощью, могут быть определены и посредством непосредственно сообщаться с атмосферным
воздухом, иначе давление там упадет и из го-
обычных цветных реакций, хотя и с большей
релки может засосаться взрывоопасная смесь.
затратой труда и часто менее точно, поэтому
Помимо этих блоков, обязательных для всех
атомная абсорбциометрия оказывается методом
выбора. приборов, некоторые могут быть снабжены раз-

29
личными дополнительными сервисными устрой- Как уже отмечалось, в то время как опреде-
ствами: электрическим поджигателем газовой ление калия и натрия методом пламенной фото-
горелки, автоматическим разбавителем проб, метрии является обязательным анализом для
устройством, печатающим результаты, и т, д. всех крупных лабораторий, определение других
Существует несколько возможных схем ра- металлов: кальция, магния, железа и т. д.—
боты на пламенном фотометре. В самом простом может быть выполнено как обычными химиче-
случае, который обычно и практикуется при скими методами, так и посредством атомно-
исследовании мочи или плазмы крови, исследуе- абсорбционного анализа, который тем самым
мый материал разводят водой в 50 или 100 раз, является методом выбора и сравнительно мало
свет, образующийся при его сжигании в пламе- используется в клинических лабораториях.
ни, проходит через светофильтр и попадает на Здесь надо иметь в виду еще и то обстоятель-
фотоэлемент, интенсивность тока которого реги- ство, что в биологических жидкостях такие
стрируется. В связи с тем что иногда бывает элементы, как кальций и магний, лишь частично
трудно достаточно хорошо выделить нужную находятся в биологически активном ионизиро-
спектральную линию, используют также так на- ванном состоянии, а атомно-абсорбционный
зываемый компенсационный метод, когда с по- анализ позволяет определять лишь общее их
мощью зеркал и линз формируется два пучка содержание. Однако при определении микроэле-
света: один проходит через светофильтр, выде- ментов: меди, марганца, цинка, а также токсиче-
ляющий характерную для исследуемого элемен- ских веществ, особенно ртути, преимущества
та линию спектра, а второй — линию того эле- атомно-абсорбционного анализа проявляются в
мента, который создает помехи, затем из показа- полной мере. Особенно удобны те варианты ме-
теля первого фототока вычитают второй. тода, в которых применяется беспламенная ато-
Можно также использовать метод внутрен- мизация, так как выпаривание пробы, ее озоле-
него стандарта, когда исследуемую биологиче- ние и перевод в парообразное состояние про-
скую жидкость разводят не водой, а слабым исходят в одном и том же устройстве. При
раствором элемента, которого нет в биологиче- определении веществ, которые находятся в био-
ском материале, чаще для этого используют логическом материале в ультрамикроколиче-
соли лития. В процессе анализа делают два ствах, чувствительность метода иногда оказыва-
измерения: со светофильтром, пропускающим ется недостаточной, в этих случаях применяют
излучение измеряемого элемента, и со свето- концентрирование путем образования комплек-
фильтром, пропускающим излучение внутренне- сных соединений с пирролидондитиокарбоматом
го стандарта; если показания внутреннего стан- аммония (ПДКА), которые экстрагируют мети-
дарта отличаются от того, что было при ка- лизобутилкетоном (МИБК).
либровке, то вносят соответствующую поправку
и в измеряемый ток. Такой порядок работы
позволяет избежать ошибок, связанных с не- 1.6.4. Иммунохимические методы
стандартными условиями распыления; это быва-
ет важно в том случае, когда исследуются При взаимодействии антигена и специфиче-
жидкости, вязкость которых может значительно ского иммуноглобулина, который по традиции
колебаться (слюна, желудочный сок и т. д.). называется антителом, образуется высокомоле-
Чтобы создать одинаковые условия возбуж- кулярный комплекс, растворимый как в избытке
дения исследуемого элемента при анализе проб, антител, так и в избытке антигена (рис. 3); его
в которых содержание других составных частей можно использовать, чтобы судить о содержа-
значительно колеблется, используют также раз- нии антигена, но это не простая задача. Долгое
ведение исследуемых проб так называемым фо- время не могли найти подходящего решения
ном, т. е. раствором, содержащим такие количе- этой задачи и иммунохимические методы были
ства элемента, определенным образом влияюще- лишь качественными или в лучшем случае полу-
го на интенсивность свечения исследуемого количественными. Однако за последние 30 лет
элемента, чтобы возможные колебания состава найдено несколько путей для преодоления в той
посторонних веществ в пробе уже не сказыва- или иной степени возникших трудностей. Это
лись. делает антитела очень чувствительными и специ-
фическими реактивами для определения чрезвы-
В клинической лабораторной практике метод
чайно широкого класса органических веществ,
внутреннего стандарта и разведения проб «фо-
в первую очередь белков. Чаще всего использу-
ном», как правило, не используется; компенса-
ют три способа: 1) преципитацию в геле, 2) свя-
ционный метод измерения используется только
в том случае, если это предусмотрено конструк- зывание меченых веществ и 3) изучение физиче-
ских характеристик образующихся макромоле-
цией прибора. Для того чтобы анализы сыво-
кулярных комплексов.
ротки крови и мочи были выполнены с необходи-
мой точностью, практически достаточно пра- Существует огромное количество вариантов
метода преципитации в геле. Однако в любом
вильно приготовить комплексный калибровоч-
случае в прозрачной желеобразной среде тем
ный раствор, который одновременно содержит
или иным способом создается либо градиент
и калий, и натрий в концентрациях, близких
концентрации антигена при постоянной концен-
к тем, которые бывают в исследуемом материа-
ле. Однако в моче и плазме крови соотношение трации антител, либо градиенты концентраций
этих элементов различное, поэтому калибровоч- той и другой компоненты. В том месте, где их
содержание эквивалентно, выпадает осадок —
ный график для мочи не может быть использо-
образуется зона преципитации, заметная нево-
ван для сыворотки и наоборот.
30
оружейным глазом. Ее форма и положение
говорят о составе и концентрациях антигенов.
- Связывание меченых веществ также суще-
ствует во многих вариантах, оно составляет
основу метода конкурентного связывания, или
сатурационного анализа. В этом случае образо-
вание комплекса антиген — антитело проводят
так, чтобы в него включился весь исследуемый
антиген и еще некоторое количество меченого
соединения. Затем комплекс отделяют от непро-
реагировавших составных частей и по количе-
ству метки судят о содержании антигена.
Третий путь основан на том, что размер
молекулы комплекса значительно больше, чем Рис. 3. Образование преципитата при иммуно-
молекулы антитела или антигена, поэтому и фи- химических реакциях. На оси ординат — коли-
зические свойства: растворимость, способность чество осадка комплекса антиген—антитело;
рассеивать свет и флюоресцировать — иные. на оси абсцисс — отношение количеств анти-
Проще всего исследовать светорассеивание ген—антитело в условных единицах.
(т. е., попросту говоря, помутнение раствора) I — зона избытка антитела; 11 — зона избытка анти-
гена.
в результате выпадения осадка. Но чтобы оса-
док образовывался количественно, нужны спе-
циальные условия, которые долгое время были
неизвестны. Оказалось, что в присутствии кол-
лоидов свободный объем раствора, в котором пропитывается антителами и в луику вносят
могут присутствовать белковые молекулы, исследуемую жидкость. Однако в данном вари-
уменьшается и реакция антиген — антитело анте антиген перемещается в гель не в результа-
идет значительно быстрее и с лучшим количе- те простой диффузии, а под влиянием нало-
ственным выходом. женного электрического поля, т. е. так же, как
Методы преципитации в геле. Наиболее рас- при электрофорезе. Благодаря этому образова-
пространены четыре перечисленные ниже вари- ние преципитата идет значительно быстрее, зона
анта методов определения антигенов преципита- преципитации имеет характерную форму за-
цией в геле. остренных языков, отдаленно напоминающих
1. Радиальная иммунодиффузия по Манчи- контуры космических ракет на старте (отсюда
ни: в этом случае прозрачный гель в чашке и название: по-английски ракета «rocet»). Рас-
Петри пропитывается антителами, в нем выреза- стояние от лунки до верхушки зоны примерно
ют лунку, куда помещают исследуемый раствор: пропорционально концентрации антигена.
Антиген диффундирует из лунки в гель, где 4. Классический иммуноэлектрофорез по
создается неравномерная концентрация — вы- Грабарю или Вильямсу дает наиболее разверну-
сокая по краям лунки, убывающая обратно тую картину антигенного состава исследуемой
пропорционально квадрату расстояния от ее жидкости. В этом случае исследуемую жидкость,
краев. В том месте, где концентрация антигена например сыворотку крови, подвергают обычно-
и антитела эквивалентны, образуется зона пре- му электрофорезу в геле, при этом белки выстра-
ципитации в виде кольца. Чем выше концентра- иваются в линию соответственно своей электро-
ция антигена в лунке, тем больше радиус кольца. форетической подвижности. После этого прово-
2. Встречная или двойная, иммунодиффузия дят встречную иммунодиффузию в поперечном
по Оухтерлони отличается от радиальной тем, направлений против поливалентной иммунной
что слой геля предварительно не пропитывается сыворотки, в результате образуется сложная
антителами, а их раствор вносят в специальную система дуг преципитации.
лунку, находящуюся по соседству с лункой анти- Метод конкурентного связывания (сатураци-
гена. Оба вещества диффундируют одно на- онный анализ). Суть метода конкурентного свя-
встречу другому, в результате чего создаются зывания заключается в том, что некоторые
градиенты концентраций, и антител, и антигена. вещества — лиганды — способны весьма изби-
В простейшем случае зона преципитации имеет рательно связываться с исследуемым соединени-
форму прямой линии, которая проходит между ем, при этом нет различия между веществом
лунками антигена и антител. Но если лунок не биологического происхождения (анализируе-
две, а больше (например, одна лунка антител, мым) и его меченым аналогом, добавленным
вокруг которой несколько лунок с разными раз- извне. Они конкурируют за лиганд, который
ведениями испытуемого раствора, или же одна должен быть добавлен в таком количестве, что-
лунка со смесью антител, вокруг которой не- бы его связывающая способность полностью
сколько лунок с идентичными или неидентичны- насытилась (отсюда и название "сатурацион-
ми антигенами), образуются довольно сложные ный» — насыщающий анализ). Очевидно, что
фигуры. По ним можно судить не только о коли- чем больше в пробе определяемого вещества,
честве, но и о структуре исследуемых веществ, тем меньше связывается меченое вещество. По-
3. Ракетный электрофорез, который называ- сле этого отделяют комплекс от свободных ин-
ют-также электроиммуноопределением, основан гредиентов и подсчитывают количество метки —
на том же принципе, что и радиальная иммуно- в одних вариантах в комплексе, в других не
диффузия, т. е. пластинка геля предварительно связанного с комплексом.

31
. Особенность метода конкурентного связыва- низкомолекулярными веществами, позволяю-
ния заключается в том, что используют лиганды щие получать антисыворотки с высокими титра-
исключительно биологического происхождения; ми специфических антител. В этой связи следует
меченое соединение обычно получают из при- упомянуть также о способе получения моноспе-
родного, присоединяя к нему метку в виде цифических клоновых антител, которые выра-
отдельного атома или химической группировки. батываются не в целом организме, а в тканевых
Как следует из краткого описания принципа, культурах, в которых растут клетки, в больших
метод конкурентного связывания имеет два неу- количествах продуцирующие только нужные им-
добства: во-первых, это нелинейная зависимость муноглобулины (обладающие свойствами ка-
между результатом непосредственного измере- ких-либо антител). Такие культуры получают
ния, т. е, количеством меченого соединения, и ис- путем гибридизации лимфоидных клеток имму-
следуемым параметром, т. е. содержанием опре- низированного животного со злокачественными
деляемого вещества; во-вторых, это многоэтап- клетками, обладающими свойствами неограни-
ность анализа. Оба обстоятельства сказываются ченно расти в тканевых культурах. Затем отби-
на точности определения, причем особенно важ- раются (клонируются) клетки, обладающие
но помнить, что в силу нелинейности хорошие нужными качествами, т. е. способностью проду-
результаты получаются лишь в определенном цировать требуемые антитела и неограниченным
диапазоне концентраций исследуемого веще- ростом в культуре.
ства, поэтому обычно рекомендуют каждую про- Транспортные белки крови обычно использу
бу исследовать два или даже три раза (в дупле- ются в качестве лигандов при определении сте-
тах или триплетах), отбрасывая результаты, роидных гормонов, в частности глюкокортикои-
которые находятся вне нужного диапазона. Од- дов. Транскортин удобен как лиганд потому, что
нако эти недостатки компенсируются необыкно- он необязательно должен быть использован в
венно высокой чувствительностью и избиратель- чистом виде (реактивом может быть лишь незна-
чительно обогащенная фракция или даже сыво-
ностью метода, широкое внедрение которого
вызвало переворот в традиционных методах кли- ротка) и не обладает видовой специфичностью,
нической биохимии. поэтому пригодны сыворотки различных лабора-
По своему принципу метод конкурентного торных и домашних животных. Недостаток ис-
связывания примыкает к классическим иммуно- пользования транспортных белков состоит в том,
логическим методам, основанным на реакции что они не очень специфичны и, как правило, не
связывания комплемента, однако количество позволяют дифференцировать гормоны от их
непосредственных метаболитов (например, кор-
комплемента может быть определено лишь полу-
количественно. Кроме того, для этого метода тизол, кортизон и гидрокортизол).
необходимы определенным образом обработан- Третий источник лнгандов — белки из орга-
ные эритроциты (или другие заменяющие их нов-мишеней — шире всего используется для
частицы), в то время как реактивы, используе- определения эстрогенов. В целом они обладают
мые для сатурационного анализа, значительно свойствами, аналогичными транспортным бел-
легче стандартизуются и более устойчивы. Одна- кам крови, но их извлекают путем соответствую-
ко приготовление их настолько сложно, что щей обработки из органов лабораторных жи-
недоступно практическим лабораториям, поэто- вотных, чувствительных к эстрогенам, например
му в условиях клинико-диагностических лабора- из матки крыс.
торий метод конкурентного связывания может Чтобы получить меченое соединение, обычно
быть выполнен лишь с помощью промышленно используют чистый препарат определяемого ве-
изготовленных готовых наборов реактивов, так щества, полученный из биологического источни-
называемых китов (от английского слова kit, ка или синтетическим путем. Белковые вещества
означающего набор инструментов или команду). удобно метить, вводя в их состав радиоактивный
|25
В клинической биохимии и иммунологии йод — обычно изотоп I; для этого препарат
метод конкурентного связывания шире всего инкубируют с радиоактивным индикатором в
используется для определения трех групп ве- присутствии окислителя, а затем очищают от
ществ: 1) гормонов—как белковой природы, побочных продуктов. Низкомолекулярные веще-
так и небелковых; 2) индивидуальных белков — ства метят тритием путем неспецифического
как нормально присутствующих (альбумин, изотопного обмена. Использование радиоактив-
макроглобулин и т. д.), так и появляющихся ных меченых соединений связано с теми неудоб-
в условиях патологии (антитела к микробам ствами, что для работы с ними необходима
и вирусам и белки инфекционных агентов); специально оборудованная лаборатория, поэто-
3) лекарственных соединений и вредных веществ му все большее распространение приобретают
из окружающей среды, что относится к сфере такие варианты метода конкурентного связыва-
фармакодинамики и токсикологии. ния, в которых исследуемое вещество метится
В качестве лигандов используются три ферментом. Таким способом можно пометить
группы веществ биологического происхождения: лишь относительно крупные молекулы, так как
образовавшаяся химическая связь не должна
1) антитела; 2) специфические транспортные
белки плазмы крови; 3) рецепторные белки орга- затрагивать функционально важные группы
нов-мишеней. Наибольшее значение имеет ис- ни в молекуле меченого соединения, ни в фер-
менте
пользование антител, полученных путем имму-
низации. Сатурационный анализ стал возможен Очень важная техническая проблема — от-
лишь после того, как были разработаны весьма деление связанных с лигандом меченого и неме-
совершенные способы иммунизации, в том числе ченого соединений от их свободных форм. Для

32
решения этой задачи применяются самые разно-
образные приемы, причем может удаляться сво-
бодная форма и подсчитываться количество
связанной формы, а может быть и наоборот —
удаляться связанная форма и определяться
количество свободной формы. Однако во всех
случаях для разделения используется суще-
ственное различие в молекулярной массе ком-
плекса и свободных форм определяемого веще-
ства. Более крупные молекулы комплекса можно
отделить гель-фильтрацией или электрофорезом,
а также осаждая их полиэтилеигликолем. Воз-
можен такой вариант анализа, когда лиганд
заранее адсорбирован на твердой фазе — бром-
ацетил целлюлозе, полиэтилене н т. д., поэтому
комплекс легко отделяется от находящихся в
растворе свободных форм определяемого веще-
ства. Используется также так называемый ме-
тод двойных антител, когда комплекс лиганд —
определяемое вещество осаждается (преципити-
руется) после добавления антител против белка
самого лиганда. Свободные формы можно уда-
Рис. 4. Комплекс, образующийся при одном из
лить также, адсорбировав их на специфических
вариантов определения сывороточного альбу-
сорбентах, которые не связывают комплекс ли-
мина с помощью связанного с иммуносорбентом
ганда и определяемого вещества, например на энзима (схема).
целлюлозе, амберлнте, силикагеле, активиро-
АЛБ — сывороточный альбумин человека (опреде-
ванном угле. Особенно широкое распростране-
ляемое вещество); римскими цифрами обозначены
ние при определении низкомолекулярных гормо- компоненты аналитической системы: I — полистн-
нов получило использование активированного реновая стенка лунки ммкротнтратора; II — первич-
угля, покрытого декстраном, тонкий слой кото- ные антитела (из сыворотки кролика, иммунизиро-
рого пропускает лишь молекулу гормона, кото- ванного против сывороточного альбумина человека);
III—вторичные антитела (из сыворотки морской
рая поэтому адсорбируется на угле, а высокомо-
свинки, иммунизированной против сывороточного
лекулярный комплекс остается в растворе. Та-
альбумина человека); IV — пероксидаза из хрена,
кой прием получил название мгновенного фиксированная на кроличьих антителах против
диализа. иммуноглобулинов морской свинки.
Определение при помощи энзима, связанного
с иммуносорбентом. Определение «при помощи
энзима, связанного с иммуносорбентом (сокра-
ловеческого альбумина; они фиксируются на тех
щенно ЭЛИСА — заглавные буквы английских
слов — Enzyme Linked Immunosorbent Assay), же альбуминовых молекулах, которые другими
представляет собой дальнейшее развитие мето- группами адсорбированы на первичных антите-
да двойных антител, используемого в сатурацн- лах. Четвертый слой иммунного «пирога» —
онном анализе, но здесь отсутствует конкурен- фермент пероксидаза, фиксированная на кро-
ция между определяемым природным соедине- личьих антителах против иммуноглобулинов
нием и его меченым вариантом. Суть метода морской свинки; они связываются со вторичны-
ми антителами, при этом количество фиксиро-
заключается в том, что образуется нечто вроде
ванной пероксидазы оказывается пропорцио-
слоеного пирога, причем определяемое веще-
ство составляет один из его внутренних слоев, нальным содержанию альбумина в исследуемой
пробе. После добавления каждого реагента и за-
а индикаторный фермент — самый внешний; об-
вершения реакции связывания избыток непроре-
щий размер всей структуры зависит от количе-
ства определяемого вещества. Рассмотрим фун- агировавших белков тщательно удаляют отмы-
кционирование этого метода на примере набора ванием буферным раствором, кроме того, до-
бавляют инактивированные Сыворотки для
для определения альбумина в моче (рис. 4).
подавления неспецифических реакций. После
Определение выполняют в лунках (гнездах),
стенки которых изготовлены из специального син- окончания всех адсорбции н отмываний прово-
тетического материала, эффективно адсорбиру- дят ферментативную реакцию, для чего в лунку
добавляют о-фениленднамин и перекись водоро-
ющего антитела,— полистирена. Сначала в них
да. Благодаря присутствующей пероксндазе
вносят так называемые первичные антитела, в
данном случае кроличьи антитела против чело- о-фенилендиамин окисляется, и через некоторое
веческого альбумина, затем после их адсорбции время интенсивность окраски измеряется фото-
на стенках и отмывания избытка вносят исследу- метрией.
емую пробу. Содержащиеся в ней молекулы Для иммуноферментных исследований не
альбумина через посредство первичных антител только в методе ЭЛИСА, но н в других его вари-
оказываются фиксированными на стенках лун- антах чаще всего используется пероксидаза, так
ки. Затем добавляют вторичные антитела: в дан- как этот фермент с небольшой молекулярной
ном случае источником их служит сыворотка массой, который легко определять, но находят
применение и другие энзимы, например щелоч-
морской свинки, иммунизированной против че-

2 п/р В. В. Меньшикова 33
Исследование светорассеивання. В обычных
условиях осадок комплекса антиген-антитело
образуется медленно, ему препятствует как из-
быток антител, так и антигена. Это затруднение
удается в значительной степени преодолеть, если
реакция проходит в растворе коллоида, обычна
полиэтиленгликоля. Его большие молекулы, за-
нимая значительный объем раствора, вытесняют
оттуда молекулы белков, относительная концен-
трация которых в свободном пространстве повы-
шается, а взаимодействие ускоряется. В резуль-
тате область, в которой имеется достоверная
зависимость между количеством добавленного
антигена и размером осадка (преципитатом),
значительно расширяется и ход реакции ускоря-
ется. Поэтому, проводя иммунохнмнческую ре-
акцию в растворе полиэтиленгликоля, удается
определять содержание антигена по светорассе-
иванию (мутности) пробы уже через несколько
минут после добавления антител. Чаще всего
измерения проводят по конечной точке, когда
реакция уже остановилась и светорассеивание
больше не увеличивается, но существует и дру-
гой вариант пробы, когда измеряется скорость
нарастания мутности.
Классическая теория светорассеивання, раз-
работанная Релеем, рассматривает случай,
когда размер рассеивающей частицы мал по
сравнению с длиной волны, составляя '/10 ее или
меньше. Для фиолетового света с длиной волны
400 им это составляет 40 нм, а для красного
света с длиной волны 700 нм размер релеевской
частицы не должен превышать 70 нм. Для срав-
нения заметим, что наибольший диаметр моле-
кулы альбумина 8 нм, IgG — 20 нм, а длина
молекулы фибриногена (которая имеет форму
нити) — около 50 нм.
Интенсивность релеевского светорассеива-
ния зависит от длины волны света и угла, под
которым измеряется рассеянный свет по отноше-
Ряс. 5. Угловое распределение света, рассеян- нию к падающему: оно обратно пропорциональ-
ного частицами разного размера. но четвертой степени длины волны, когда вперед
А — размер частицы меньше, чем 1/10 длины волны и назад попадает немного больше света, чем
света; Б — размер частицы больше, чем 1/10 длины в бок, но диаграмма симметрична (рис. 5). Если
волны света, но меньше длины волны света; В — раз- же размер частиц больше 1/10 длины волны,
мер частицы больше, чем длина волны света.
рассеивание света становится несимметричным,
т. е. вперед по отношению к лучу падающего
света его интенсивность заметно больше, чем
ная фосфатаза. Вместо фенилендиамина иногда
в задней полусфере. Характер этого распределе-
используют другие хромогенные субстраты или
ния также зависит от размера частиц (см. рис.
образование молекулярного йода из его солей
5). В ряде случаев оказывается выгодным изме-
под влиянием перекиси водорода.
рять свет рассеянный не под углом 90 ° к падаю-
Метод ЭЛИСА очень чувствителен и высо-
щему лучу, а под меньшими углами, что значи-
коспецифичен; в отличие от радиоиммунных
тельно повышает чувствительность.
методов он не требует специальных условий.
Многочисленные адсорбции и отмывания, кото- Судить о мутности раствора можно двумя
рые проводятся по ходу определения, занимают способами: по количеству рассеянного света и По
5—6 ч, требуя постоянного внимания работника. количеству прошедшего; первый способ называ-
Поэтому для выполнения анализа изготовляют- ется нефелометрией, второй — турбиднметрией.
ся специальные приборы, в которых эти опера- Нефелометрия точнее и надежнее, так как фон,
ции механизированы или даже автоматизирова- т. е. показания прибора, когда он заполнен про-
ны. Результаты во многом зависят от качества зрачным раствором, очень мал и даже неболь-
материала, использованного для приготовления шое количество взвешенных частиц приводит
лунок микротитратора. В результате многосту- к заметному возрастанию сигнала, который в
пенчатости анализа зависимость между содер- широких пределах пропорционален размеру
жанием исследуемого вещества в пробе и окра- осадка. Если же измерение проводят в турбидит
ской, которая развивается в результате фермен- метрическом варианте, то количество преципи-
тативной реакции, обычно нелинейная. тата должно быть таким, чтобы рассеялось не
34
Т а б л и ц а 8. Сравнительная характеристика некоторых
нммунохимическнх методов




менее 10—20% света, иначе измерение будет работе с лампами накаливания; благодаря па-
недостоверным. Кроме того, неизвестен физиче- раллельности пуука удается избавиться от бли-
ский закон, связывающий количество света, ков. В лазерном нефелометре можно измерять
прошедшего через мутный раствор, и число свет, рассеянный в направлении, близком к на-
частиц, поэтому калибровочные графики всегда правлению освещающего; это оправдывает себя
сугубо эмпиричны и трудно добиться хорошей в том случае, когда частицы большие и свет
воспроизводимости. Зато турбидиметрические рассеивается вперед значительно больше, чем
измерения не требуют специального прибора, вбок и назад. Частицы иммунных комплексов
измерения можно выполнять на любом фото- как раз такие.
метре или спектрофотометре. Метод поляризационной флюорометрии по
Нефелометрировать можно на специальном своему принципу близок к методу конкурентного
приборе — нефелометре или флюорометре. Раз- связывания, поскольку там также идет конку-
личие между этими приборами состоит в том, что ренция между меченым и немеченым соединени-
при нефелометрии длина волны первичного све- ем за антитела, но исследование поляризации
та, которым освещается раствор, и вторичного, света флюоресценции позволяет определять ко-
в данном случае рассеянного, одинакова, поэто- личество флюоресцирующего соединения, обра-
му нет необходимости во вторичном светофиль- зовавшего комплекс механически, не отделяя его
тре. При флюорометрии раствор освещается от свободной формы. В этом методе меченые
светом, длина волны которого меньше, чем дли- соединения получают, присоединяя к молекуле
на волны излучаемого света, поэтому требуются определяемого вещества молекулу флюоресцеи-
два светофильтра — первичный и вторичный, на — вещества, способного ярко светиться зеле-
Если же оба они одинаковы или вторичного ным светом при освещении его синим светом.
светофильтра вообще нет, флюорометр можно Способ химического присоединения флюоресце-
использовать как нефелометр. нна к белковым молекулам был разработан
При нефелометрии абсолютное количество давно и широко используется при приготовлении
рассеянного света не имеет большого значения, флюоресцирующих антител.
так как чувствительность прибора обычно вели- Физически явление флюоресценции заключа-
ка. В связи с тем что надо измерить количество ется в том, что молекула вещества, поглощая
светорассенвающих частиц безотносительно их квант света, переходит в возбужденное со-
формы и размера, удобно работать в красной стояние, в котором находится очень неболь-
области спектра: длина волны больше и спектр шой промежуток времени, а затем возвращается
частиц, которые ведут себя как релеевские, ши- в исходное состояние, испуская при этом квант
ре: Если проводят турбидиметрическое измере- света с длиной волны, которая несколько боль-
ние, очень важно увеличить долю рассеянного ше, чем у света, который использовался для
света, которая, согласно теории Релея, -обратно возбуждения флюоресценции. Если за время,
пропорциональна четвертой степени длины во- прошедшее между поглощением света и его ис-
лны» т. е. в фиолетовой области значительно пусканием, молекула флюорофора не изменила
больше, чем в красной. Поэтому выбирают све- своего положения в пространстве, то свет флюо-
тофильтр, с самой короткой длиной волны, обыч- ресценции будет поляризован в той же плоско-
но 340 им. сти, в которой поляризован и возбуждающий
Чувствительность метода зависит и от фона, свет. Если же молекула успела повернуться на
т.,е. света, рассеянного чистым растворителем. некоторый угол, то соответственно изменяется
Эта величина определяется многими причинами, и плоскость поляризации излучаемого света.
в том числе фокусировкой пучка света. Тут лазер Поэтому исследование поляризации флюорес-
дает значительные преимущества: интенсив- ценции называют молекулярной вискозимет-
ность освещающего (и, следовательно, рассе- рией, она позволяет оценить скорость вращения
янного) света велика; нет нагревания, как при молекул исследуемого вещества. В связи с тем

35
Диапазон измерения ко
что большие молекулы комплекса антиген -
антитело вращаются значительно медленнее, эффициента. светопро-
пускания, %
чем небольшие молекулы определяемого веще- 10—100
ства, меченного флюоресцеинрм, метод позволя- Спектральный диапазон
ет определять одно из них в присутствии пропускания, нм 400—650
другого.
Ширина выходной щели
Практически анализ проводят следующим прибора, мм 0,1; 0,2; 0,3; 0,4.
образом:, так же как в остальных вариантах
метода конкурентного связывания, к исследуе- Скорость перемещения
мой пробе добавляют известное количество оп- электрофореграммы,
ределяемого вещества, меченного флюоресцеи- 0,5; 1; 5; 10; 20
мм/мин
ном, затем титрованный раствор антител. После Продолжительность не-
того как реакция завершена и наступило равно- прерывной работы, ч (не
весие, раствор облучают поляризованным све- 8
менее)
том и измеряют интенсивность флюоресценции
светом, поляризованным в направлении, перпен-
дикулярном, к управлению поляризации воз- Лабораторное оборудование для пробопод-
буждающего света. В таких условиях светятся готовкн. Д о з а т о р ы п о л у а в т о м а т и-
только молекулы свободного меченого соедине- ч ес к и е п и п е тo ч н ы е П1 (СССР) предна-
ния, а молекулы, вошедшие в комплекс с антите- значены для дозирования реактивов и биожид-
лом, не светятся, так как весь излучаемый ими костей. Обладают высокой Точностью дозирова-
свет поляризован в том же направлении, что ния, легки, удобны и надежны в эксплуатации.
и возбуждающий (табл. 8). Дозаторы П1-О,2 и П1-0,5 — поршневого ти-
па, дозаторы П1О,02, П1-0,05 и П|-0,1—
плунжерного типа без стеклянного цилиндра,
поршень заменен металлическим плунжером, уп-
лотненным эластичной втулкой. Корпус дозато-
1.6.5. Некоторые виды
ров заканчивается наконечником, на который
лабораторного оборудования
надевают сменные насадки, позволяющие уско-
рить отбор проб биожидкостей от разных паци-
Приборы для электрофореза на пленке из ентов. Использованные сменные насадки стери-
ацетата целлюлозы. Аппарат для лизуют. Технические характеристики полуавто-
э л е к т р о ф о р е з а н а п л е н к е и з аце- матических пипеточных дозаторов П1 приведены
в табл. 9.
т а т а ц е л л ю л о з ы (ЭПАУ 20-50) предна-
значен для разделения белков сыворотки на Д о з а т о р а в т о м а т и ч е с к и й по-
пленках из ацетата целлюлозы. Аппарат позво- р ш н е в о й АХ-3-5. Химически стойкий трех-
ляет выполнять электрофорез на ацетатцеллю- компонентный дозатор. Предназначен для дози-
лозных пленках в микроварианте, что обеспечи- рования реактивов (кислот с концентрацией до
вает значительную экономию реактивов и элек- 20 %), растворов щелочей и солей (с концентра-
цией до 6 %). Состоит из механизма перемеще-
троэнергии. Оборудование состоит из электрофо-
ретической камеры, выполненной из органиче- ния и блока дозаторов, имеющих три дозирую-
ского стекла, и источника постоянного тока. щих устройства, работающих по принципу по-
Экспериментальный завод Всесоюзного научно- ршневого насоса.
исследовательского института синтетических Ниже приведены технические характеристи-
смол (г. Владимир) предоставляет ацетатцеллю- ки дозатора поршневого АХ-3-5.
лозные пленки необходимых размеров; удобнее
употреблять пленки размером 9Х 9 см, что дает
возможность наносить последовательно от 4 до Объем дозы, мл От 0,1 до 2 (через 0,1 мл)
7 образцов. Пленки выдерживают в растворе » 0,5 » 5 (через 0,5 мл)
буфера, применяемого для электрофореза. Для Предел допускае-
получения 5 фракций рекомендуется веронал- мой основной прн-
мединаловый буфер или мединал-цнтратный бу- \веденной погреш-
фер рН 8,6. Длина камеры на 4 пленки 9Х 9 см' ности, % » ±2 » ±2,5
42 см, ширина 13 см. Для визуальной оценки Сходимость дозиро-
электрофореграмм, а также прямого ;-денсцто- вания, % » 2 > 2,5
метрнрования- достаточно 1—2 мкл сыворотки; Производитель-
элюироваине фракций 1с последующим фотомет- кость, цикл/мин 15 и 30
рированием требует 3 -4 мкл сыворотки. Элёк- Питание от сети пе-
трофоретическое разделение проводят при на- ременного тока:
пряжении 200 В в течение 20 мин. После окраши- напряжение, В 220± 10 %
вания краской, например Понсю С, в течение частота, Гц 50
15 мин н просветления пленки (устранения, из- Габарит, мм:
бытка красителя) проводят измерения на денси- механизма пере-
тометре. мешивания 380 X 272 X 178
Д е н с и т о м е т р ДМ-1 предназначен для блока дозаторов 232 X 250 X 268
фотометрирования окрашенных фореграмм, по- масса общая, кг
лученных методом диск-электрофореза. (не более) 20

36
Т а б л и ц а 9. Технические характеристики полуавтоматических пипеточных дозаторов П 1




Д о з а т о р а в т о м а т и ч е с к и й по- Дозатор Имеет 3 сменные дозирующие на-
садки на 2; 5 и 10 мл. Дозирование может
р ш н е в о й м е д и ц и н с к и й А-2 (СССР)
предназначен для дозирования водных раство- осуществляться с частотой 15 доз в 1 мин, а так-
ров с содержанием солей до 5%, кислот (кроме же разовыми дозами.
уксусной, азотной и плавиковой) и оснований до Ниже приведены технические характеристи-
ки дозатора А-2.
2%.

Питание дозатора от однофазной сети переменного
220 ±22
тока; напряжение, В
частота, Гц 50 или 60
потребляемая мощность, Вт (не более) 25
Пределы дозирования, мл:
при применении насадки на 2 мл От 0,1 до 2.
> » > >5» От 0,2 до 5
От 0,2 до 10
> » » > 10 »

Цена деления шкал, мл:
шкалы для насадок на 2 и 5 мл 0,1
> > > » 10 мл 0,2
Предел допускаемого значения приведенной погреш-
ности дозатора (не более):
для диапазона дозирования От 0,1 до 2 мл
> » » От 0,2 до 5 мл и
> » » от 0,2 до 10 мл
Предел допускаемого значения среднеквадратическо-
го отклонения случайной составляющей приведенной
погрешности с доверительной вероятностью 0,9 % (не
более):
для диапазона дозирования I
От 0,1 до 2 мл
> > От 0,2 до 5 мл и 0,5
> > » от 0,2 до 10 мл
Габаритные размеры, мм 265X145X270
Масса в комплекте доставки кг (не более) 7

"
Автодилютор X и р а т и к - 21" Объем дозы, мкл:
(ЧССР). Предназначен для дозирования и раз- пробы
бавления различных объемов биожидкости. До- реактива
затор состоит из цилиндров с калиброванными
поршнями разных диаметров н системы шлан-
гов. Величина дозы зависит от диаметра поршня
н высоты хода поршня. Возможно присоедине- Продолжительность
ние автодилютора к транспортеру проб «Хира- дозирования, с (макс)
тик-12» для автоматического; дозирования за- Точность дозирования,
2 — для дозы до 20 мкл;
данного объема реактива в отдельные пробирки.
1 — для дозы 20 мкл
258X265X300
Ниже приведены технические характеристи- Габариты, мм
20
ки автодилютора «Хиратик-21». Масса, кг

37
Устройство автоматической подачи проб ра «Хиратик-21». Имеется кодирование проби-
"Хиратик-12" (ЧССР) рассчитано на 120 проби- рок для обработки калибровочных проб. Систе-
рок, помещаемых в 10 штативов по 12 штук. Все ма идентификации в устройстве позволяет иден-
штативы одновременно можно переносить в под- тифицировать 4000 проб. Многоцелевое назна-
доне вручную от одного устройства автоматиче- чение устройства, помещение проб в поддонах
ской подачи проб к другому или поместить и возможность его соединения с другими устрой-
в баню или термостат для инкубации. Интервал ствами «Хнратик» делают возможным применег
между двумя шагами дозирования составляет ние данного устройства как для механизации
2,5 с, но может быть увеличен до 10 с. На задней работ в лаборатории, так и в комплекте автома-
панели имеется гнездо для подключения дозато- тизированной лабораторной линии.

Вместимость устройства 20 калибровочных проб и 100 проб па-
циентов
Поддон с 10 штативами, штатив для 12
Организация проб
пробирок; 1-я н 7-я пробирки — для
калибровочных проб
Размер пробирок, мм 12,5X75
7,5
Вместимость пробирок, мд
Рабочая температура поддона До 100 °С
Ручное от встроенного генератора; вре-
Управление
мя шага 2,5; 10 с

Автоматическая блокировка работы — после 120-й пробы.
Возможность перемещения по шагам — в 6 проб.
Возможность пропуска дозирования для калибровочных проб.

Габаритные размеры, мм 241X202X250
Масса, кг 6

реактивов. Пределы дозирования от 250 до
Дозирующее устройство DS
201E (ГДР) предназначено для дозирования 5000 мкл. Может работать по принципу дилюто-
ра.
водных растворов, в том числе и агрессивных

Диапазон объема
Дозирующий орган (ДО) Соотношение
проб, мкл
проба/реактив
для проб для реактива

ДО-5
ДО-0,5 50—500
1:10
ДО-5 100—1000
ДО-1 1:5
ДО-5
ДО-5 250—5000
1:1

Возможно дозирование проб менее 50 мкл ДО-0,5 10 мкл
и дозирование реактивов менее 250 мкл при ДО-1 20 мкл
использовании устройства как дозатора: ДО-5 100 мкл

Ниже приведены технические данные дозирующего устройства DS 201E


Дознруюшнй
Дозируемый
Дозирующее Соотношение
Применение
орган
объем, мл проба/реактив
устройство

ДО-5
Для реактива 0,25—5,0
В качестве дозирующего
» » 2 X ДО-5
0,5—10,0
устройства —
1:1 ДО-5: ДО-5
Для пробы 0,25—5,0
В качестве разбавителя
1:5 ДО-1:ДО-5
» » 0,1—1,0
» » ДО-0.5:ДО-5
1:10
0,05—0,5



38
Приспособление для ф и к с а ц и и свете. Состоит из прозрачных корпуса и крышки.
и окраски мазков крови Корпус имеет 96 лунок цилиндрического профи-
ля. Прозрачность корпуса и крышки обеспечива-
Ф О М К - 1 (СССР) предназначено для фикса-
ции и окраски мазков крови на предметных ет визуальное наблюдение за содержимым лунок
планшета. Размеры, форма панели и расположе-
стеклах с минимальным расходом красителей
и максимальным количеством предметных сте- ние лунок позволяют использовать имеющиеся
кол. В состав приспособления входят: узел в лабораториях дозаторы для розлива. Техниче-
ские характеристики планшета: габариты
фиксации, узел окраски, узел промывки и узел
сушки предметных стекол, а также съемные 125Х84Х 14 мм; масса 0,71 кг.
Лабораторное оборудование для гематологи-
кассеты для размещения предметных стекол.
ческих исследований. Гемоцнтометр
Приспособление имеет световую сигнализацию
и обеспечивает установку времени окрашива- конду ктометричес ки й ГЦМК-3
ния мазков. Ниже приводится его техническая (СССР) предназначен для измерения кон-
характеристика. центрации эритроцитов и лейкоцитов в суспен-
зиях крови кондуктометрическим методом при
Количество одновременно помощи датчика с отверстием. Принцип дей-
окрашиваемых стекол, шт. 50 ствия основан на регистрации электрических
Время окрашивания мазков, импульсов, возникающих при прохождении мик-
мин От 2 до 30 рочастиц через отверстие датчика. Конструктив-
Напряжение, В 220 но оформлен в виде прямоугольного корпуса
Потребляемая мощность, Вт 20 с ручкой, предназначенной для ручной пере-
Габариты, мм 280X155X225 носки прибора. На передней части расположены
Масса, кг 10 осциллоскоп, устройство крепления датчика,
представляющего собой пробирку, в дно которой
Планшет для и м м у н о л о г и - введен часовой камень с микроотверстием, и ста-
ческих реакций о д н о к р а т н о г о кан для помещения пробы. С помощью гидрав-
п р и м е н е н и я предназначен для внесения в лической системы, управляемой рычагом, выве-
его лунки различных реагентов объемом 0,05— денным на боковую поверхность прибора, иссле-
0,2 мл, последующего термостатирования и м и к - , дуемую пробу протягивают через датчик и вы-
рокопирования или просмотра при естественном брасывают ее обратно в стакан.

Ниже приведены технические характеристики ГЦМК-3.
Систематическая составляющая основной относительной по-
грешности при нормальных условиях, % (не более):
для эритроцитов в диапазоне (2—8)•
лейкоцитов » » (2—20) • 109/л
»
диапазона (4—10)-10 9 /л
»
Изменение показаний при изменении температуры окружающе-
го воздуха в рабочих климатических условиях, % (не более на
каждые 10°):
питание от сети переменного тока:
220 ± 22
напряжение, В
50 или 60
частота, Гц
20
мощность, потребляемая прибором, Вт (не более)

Время установления показаний при измерении концентрации
микрочастиц в суспензиях крови, с (не более) 10

Время достижения установившегося режима, мин (не более) 5

Наработка на отказ — время условно непрерывной работы, ч
(не менее) 2500

Габаритные размеры в пределах:
длина, мм 385±3
ширина, мм 180±3
305 ±3
высота, мм
10
масса, кг (не более)
39
Гемоглобинометр фотоэ- расположено кюветное отделение блока измере-
л е к т р и ч е с к и й ГФ-Ц-04 (СССР) предна- ния для размещения в нем стеклянной прямоу-
значен для определения концентрации гемогло- гольной кюветы с исследуемой пробой (в ком-
бина в крови. Принцип действия основан на плект поставки прибора входят 2 кюветы). Ре-
измерении оптической плотности исследуемой зультаты измерений индуцируются на цифровом
табло на лицевой панели прибора. Ниже приве-
пробы. Конструктивно оформлен в виде прямоу-
гольного корпуса. В передней части прибора дены технические характеристики ГФ-Ц-04.

Диапазон определения концентрации гемоглобина в крови, г/л 0—250

Основная приведенная погрешность, вызванная нелинейностью
градуировочной характеристики прибора, % (не более) 5

Питание от сети переменного тока:
напряжение, В 220 ±22
частота, Гц 50

Мощность, потребляемая прибором, Вт (не более) 30

Время достижения установившегося режима, мин (не более) 30

Время установления показаний, с (не более) К)

Наработка на отказ — время условно непрерывной работы, ч 1500

Средний срок службы до капитального ремонта, годы (не менее) 5

Габаритные размеры в пределах:
длина, мм 370 ±10
ширина, мм 235±10
высота, мм 150 ±10



<<

стр. 2
(всего 20)

СОДЕРЖАНИЕ

>>