<<

стр. 6
(всего 20)

СОДЕРЖАНИЕ

>>

пальца (необходимо стерилизовать сухим жаром при этом крови и реактива 4 : 1 ) , пробирку
в течение I ч при 160 °С или автоклавированием встряхивают. Мякоть пальца вытирают сухим
в течение 30 мин при 1,5 атм или кипячением не ватным шариком и после надавливания соби-
менее 30 мин). 2. Пробирки. 3. Пипетки вмести- рают выступившую каплю крови.
мостью 0,02 мл (стерильные). 4. Капилляры от 5. Для определения концентрации гемогло-
аппарата Панченкова (стерильные). 5. Пипетки бина в сухую стерильную пипетку вместимостью
вместимостью 5 и 1 мл (для разводящих жид- 0,02 мл набирают кровь до метки, выдувают
костей) или бюретки. 6. Предметные стекла, ее в пробирку с раствором 2 и несколько раз
шлифованные стекла. ополаскивают пипетку в этом растворе, запол-
С п о с о б в з я т и я к р о в и . 1 . Заранее няя ее и выдувая раствор. Снова вытирают
наливают в пробирки соответствующие реак- место укола и выдавливают свежую каплю
тивы: для определения СОЭ — в капилляр Пан- крови.
ченкова набирают (до метки 0,75) реактив 1; 6. Для подсчета числа эритроцитов кровь
для определения концентрации гемоглобина — берут в количестве 0,02 мл в пипетку и выдувают
5 мл реактива 2; для подсчета числа эритро- в пробирку с реактивом 3.
цитов — 4 мл реактива 3, для подсчета числа Применявшиеся ранее смесители (мелан-
лейкоцитов — 0,4 мл реактива 4. жеры) для взятия крови с целью подсчета
106
эритроцитов и лейкоцитов в настоящее время за- у нескольких лиц. При недостаточном количе-
менены пробирочным методом, так как он точнее, стве микропипеток рекомендуется применять ча-
проще и удобнее при мытье посуды. совые стекла или лунки, при атом у каждого
В целях более точного разведения крови пациента кровь берут стерильным индивидуаль-
(в 200 раз) пипетку после выдувания крови ным капилляром от аппарата П'анченкова, поме-
несколько раз промывают раствором, находя- щают в часовое стекло или лунку, из которых
щимся в пробирке. быстро набирают кровь для соответствующего
7. Для подсчета лейкоцитов кровь берут пи- разведения, необходимого для того или иного
петкой до метки (0,02 мл) и выдувают ее в про- исследования.
бирку с раствором 4, промывают несколько раз В настоящее время в связи с появлением ге-
в растворе уксусной кислоты (разведение крови матологических автоматов стали шире исполь-
в 20 раз). Для взятия крови у одного пациента зовать для общего клинического анализа веноз-
можно пользоваться одной пипеткой вмести- ную кровь. Кровь из вены берут либо в специ-
мостью 0,02 мл, но обязательно набирать кровь альные пластиковые пробирки одноразового
для лейкоцитов в последнюю очередь (так как пользования с порошком ЭДТА, либо в стеклян-
уксусная кислота гемолизирует эритроциты). ные пробирки с другим антикоагулянтом. Необ-
8. Для исследования лейкоцитарной фор- ходимо тотчас после взятия крови закрыть про-
мулы, морфологии эритроцитов, лейкоцитов, бирку пробкой и несколько раз тщательно пере-
тромбоцитов готовят мазки крови: вытирают мешать кровь, не взбалтывая ее (опрокидывая
место укола сухим шариком ваты и наносят пробирку сначала пробкой вниз, затем пробкой
каплю крови на сухое обезжиренное предметное вверх). Тщательное перемешивание крови по-
стекло, затем быстро готовят тонкие мазки с по- зволяет избежать образования сгустков, нали-
мощью шлифованного стекла, краем которого чие которых искажает результаты исследования.
быстрым движением продвигают по предмет-
ному стеклу каплю крови (см. 3.3.2). Л и т е р а т у р а . Бейер Б. А. Краткое пособие
по гематологии. 2-е изд.— Л., 1967, с. 219; При-
Для профилактики сывороточного гепатита
каз Министерства здравоохранения СССР
запрещается брать кровь одной микропипеткой
№ 300 от 08.04.77 г.


3.2. ГЕМОГЛОБИН
Гемоглобин — основной дыхательный пиг- Поданным М. С. Кушаковского (1968), при
мент эритроцитов, относящийся к хромопротеи- суммировании различных погрешностей этого
дам и обеспечивающий ткани кислородом; со- метода ошибка при определении гемоглобина
стоит из белка — глобина и тема — соединения составляет ±30 %. Поэтому в настоящее время
протопорфирина IX с железом. Последний при- метод не может быть рекомендован.
дает гемоглобину характерную окраску. Присое- В качестве унифицированного метода в на-
динение к тему различных химических групп со- шей стране принят гемнглобинцианидный метод
провождается изменением окраски, на этом ос- с применением ацетонциангидрина.
новано и определение концентрации гемогло- Унифицированный гемиглобинцианидный ме-
бина в крови. тод (1974). П р и н ц и п . Гемоглобин окисляют
в метгемоглобин (гемиглобин) железосинероди-
етым калием (красная кровяная соль); образую-
3.2.1. Содержание гемоглобина щийся с ацетонциангндрином окрашенный циан-
метгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют
Исследование содержания гемоглобина в колориметрически.
крови (гемоглобинометрия) включает определе- Р е а к т и в ы . 1. Трансформирующий раст-
ние гемоглобина и его дериватов, которые при- вор: ацетонциангидрин — 0,5 мг; калий железо-
сутствуют в крови здоровых людей или появ- синеродистый — 0,2 г; натрия гидрокарбонат —
ляются при различных патологических состоя- I г; дистиллированная вода — до 1 л. Раствор
ниях. У здоровых в крови гемоглобин находится желтого цвета, прозрачный. При обесцвечива-
главным образом в виде оксигемоглобина, вос- нии или появлении осадка непригоден. Стабилен
становленного гемоглобина и в небольшом ко- в течение нескольких месяцев при хранении в
личестве — метгемоглобина, карбоксигемогло- посуде из темного стекла при комнатной темпе-
бина и вердоглобина. ратуре. 2. Калибровочный раствор гемиглобин-
Для определения содержания гемоглобина в цианида. Можно использовать стандартный
крови предложено много различных методов. раствор фирмы «Имуна> (ЧССР) с концентра-
Наибольшее распространение получили колори- цией гемиглобинцианида 61,23 мг/100 мл и
метрические, основанные на колориметрии про- фирмы сРеанал» (ВНР) с концентрацией веще-
изводных гемоглобина. Наиболее простым и ши- ства 59,75 мг/100 мл. Это соответствует концент-
роко распространенным в прошлом методом рации гемоглобина в крови 15,4 г/100 мл и
была колориметрия солянокислого гематина, на 15 г/100 мл при разведении ее в 251 раз. Стан-
котором основан метод Сали. Метод чрезвы- дартные растворы хранят в холодильнике (в не-
чайно прост и быстро выполним, но недоста- замороженном виде) в защищенном от света
точно точен. месте.

107
характерно для острой кровопотери, гипопла-
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Фо-
тоэлектроколориметр (ФЭК-56М или другой). стической анемии, гемолитической анемии в ста-
дни гемолитического криза, рецидива В|2-дефи-
Х о д о п р е д е л е н и я . В пробирку к 5 мл
цитной анемии (5—8 г/100 мл, или 50—80 г/л).
трансформирующего раствора добавляют
Следует, однако, иметь в виду, что диагностика
0,02 мл крови (разведение в 251 раз). Содержи-
анемии ни в коей мере не может быть проведена
мое пробирки тщательно перемешивают и
лишь на основании определения концентрации
оставляют стоять на 10 мин. Измеряют на фото-
гемоглобина в крови. Это исследование устанав-
электроколориметре при длине волны 500—
ливает только факт наличия малокровия. Для
560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с тол-
щиной слоя 1 см против холостой пробы (транс- уточнения его характера необходимо исследо-
вание количества эритроцитов, цветового пока-
формирующий раствор). Измеряют при тех же
зателя, других расчетных индексов эритроцитов,
условиях стандартный раствор.
Расчет содержания гемоглобина производят морфологии эритроцитов.
Повышение концентрации гемоглобина в
по калибровочному графику (см. ниже), по-
строенному по стандартному раствору гемигло- крови может наблюдаться при миелопролифера-
бинцианида, или по формуле: тивных заболеваниях и симптоматических эрит-
роцитозах, сопутствующих различным состоя-
ниям. Среди миелопролиферативных заболева-
ний наиболее характерно повышение гемогло-
бина при эритремин, концентрация которого
может быть в пределах 18—21 г/100 мл (180—
210 г/л). Для диагностики эритремии важно
стннкция стандартного раствора; С — концент-
рация гемнглобинцианнда в стандартном раст- исследование и количества эритроцитов, лейко-
воре, мг%; К — коэффициент разведения крови; цитов, тромбоцитов в крови, которые, как пра-
0,001 — коэффициент для пересчета мг/100 мл вило, при этом заболевании повышаются.
Симптоматические реактивные эритроцитозы
в г/100 мл.
могут быть абсолютными (обсусловлены проли-
ферацией элементов эритропоэза) и относитель-
ными (гемокониентрацнонные). Физиологиче-
ское увеличение содержания гемоглобина свой-
ственно новорожденным.
Л и т е р а т у р а . Кушаковский М. С. Кли-
нические формы повреждения гемоглобина.—
Л., 1968, с. 22; Грибова И, А. Гематологическая
норма.— В кн.: Руководство по гематологии
/Под ред. А. И. Воробьева, Ю. И. Лорие. М.:
Медицина, 1979, с. 52.

Измеряют против «холостой» пробы.
Определение содержания гемоглобина с по- 3.2,2. Фракции гемоглобина
мощью счетчика к гематологического автомата.
П р и н ц и п см. «Унифицированный гемигло- У здорового человека имеется три основных
бинцианидный метод». типа гемоглобина: примитивный — Р, феталь-
О б о р у д о в а н и е . Счетчик или гематоло- ный — F и взрослый А, каждый из которых де-
гический автомат. лится на подтипы. Гемоглобин Р, характерный
Х о д - и с с л е д о в а н и я соответствует ин- для ранней эмбриональной стадии, состоит из
струкции, приложенной к прибору. подтипов Говер I я Говер П. В составе гемогло-
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро- бина Р, кроме основной, выделены еще две фор-
вых людей концентрация гемоглобина в крови мы: 1) Фессаса и Папаспиру и 2) Александра:
составляет 13,2—16,4 г/100 мл (132—164 г/л Гемоглобин А имеет несколько фракций: A I ,
в международной системе единиц — СИ) у муж- А2, АЗ. У здорового взрослого человека фрак-
чин и 11,5—14,5 г/100 мл (115—145 г/л) у жен- ция A1 является основной, составляя %—98 %;
щин [Грибова И. А., 1979]. фракция А2 не превышает 3 %,А 3 — в виде сле-
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение дов, гемоглобин F не более 2 %. Фракция AI де-
концентрации гемоглобина в крови является лится на несколько подфракций: A I а , А1б, А1с,
основным лабораторным симптомом анемии. А1d. У плода до 3-месячного возраста преобла-
При этом содержание гемоглобина варьирует дает тип Р, который затем заменяется гемогло-
в широких пределах в зависимости от формы бином F, а у новорожденного последний состав-
анемии и ее степени. Так, при наиболее частной ляет всего 20 %, остальной представлен типом А.
форме малокровия — железодефицитной ане- В дальнейшем гемоглобин F продолжает умень-
мии — у большинства больных отмечается от- шаться и к 4—5 мес достигает величин взрослого
носительно умеренное снижение гемоглобина человека (1—2%).
(8,5—11,4 г/100 мл, или 85—114 г/л), а более Гемоглобин F отличается от А значительной
выраженное уменьшение (6—8,4 г/100 мл, или устойчивостью к действиям щелочи. Химическое
60—84 г/л) наблюдается реже. Значительное различие состоит в структуре полипептидных
снижение концентрации гемоглобина в крови цепей глобина: в гемоглобине А имеются 2а-
108
и 2в-цепи (а2, в2), в гемоглобине F в-цепи заме- где Е1 — зкстинкция общего раствора гемогло-
нены у-цепями (а2, у 2 ). бина; Е2 — экстинкция раствора гемоглобина F;
Метод Зингера [Singer et al., 1951]. Ез — экстинкция «холостой» пробы.
П р и н ц и п . Определение основано на щелоче- Менее точное представление о содержании
устойчивости гемоглобина F; с помощью щелочи гемоглобина F дает цитохимическое исследова-
проводят денатурацию гемоглобина A, a F опре- ние (метод Бетке) (см. 3.3.9).
деляют спектроскопически. К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Повыше-
Р е а к т и в ы . 1. Раствор едкого натра 1/12 н. ние гемоглобина F является важным критерием
(рН 12,7); хранят в парафинированном сосуде для диагностики Р-талассемии, при которой одно-
в холодильнике. 2. Раствор сульфата аммония; временно повышается и содержание гемоглоби-
к 350 г аммония (NН4)2SO4 добавляют 500 мл на A2. Особенно высокие цифры гемоглобина F
дистиллированной воды, дают постоять и сме- могут быть при гомозиготной в-талассемии до
шивают 400 мл этого раствора с равным объе- 20—90 %. При гетерозиготной в-талассемии со-
мом дистиллированной воды. Затем к 800 мл держание гемоглобина F может быть нормаль-
полунасыщенного раствора добавляют 2 мл 10н. ным или умеренно повышенным (2,5—7 %).
НС1. 3. 5 % раствор цитрата натрия. Однако надо иметь в виду, что повышение
Специальное оборудование. гемоглобина F не является специфичным для
Спектрофотометр. Р-талассемии. Оно встречается при различных
Х о д о п р е д е л е н и я . Приготовление ге- формах малокровия: других гемолитических
моглобинового раствора — гемолизата: 0,2—1 мл анемиях, железодефицитной анемии, гипопла-
исследуемой крови помещают в пробирку с 3 мл стической анемии, лейкозах и других состояниях,
5 % раствора цитрата натрия, перемешивают и сопровождающихся гипоксией. Возможно, что
центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. повышение гемоглобина F при этих заболева-
Верхний слой отсасывают и повторно 2—3 раза ниях развивается компенсаторно.
отмывают эритроциты с центрифугированием до Гемоглобин А2 отличается от гемоглобина А
полного обесцвечивания надосадочного слоя. более медленной миграцией при электрофорезе,
Затем добавляют к осадку равный объем дистил- на этом основаны методы его определения. Хи-
лированной воды, хорошо перемешивают, Цент- мическая структура полипептидных цепей гло-
рифугируют 15—20 мин при 6000 об/мин. Отоб- бина у гемоглобина А2 характеризуется нали-
ранный верхний слой исследуют. Гемолизат чием двух цепей а и двух цепей б (а2, б 2 ). Иссле-
можно хранить в холодильнике несколько недель. дование гемоглобина А2 наиболее информативно
В 1 мл дистиллированной воды разводят при использовании электрофореза на ацетатцел-
0,2 мл гемолизата с приблизительной концент- люлозе (см. исследование белков).
рацией 10 г% (100 г/л). Определяют общее со- К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Повыше-
держание гемоглобина (A + F) на спектрофото- ние содержания гемоглобина А2 характерно для
метре при длине волны 541 нм в кювете с толщи- р-талассемии; при гетерозиготной форме болез-
ной слоя 1 см. ни содержание As составляет 4,2—8,9 %.
Для изоляции гемоглобина F в пробирку с
Л и т е р а т у р а . Kunkel Н. С., Wal-
3,2 мл 1/12 н. раствора едкого натра, предвари- lenius G — Sciense, 1955, vol. 122, p. 288; Sin-
тельно помещенную в водяную баню на 10 мин
ger K., ChernoffA., Singer L.— Blood, 1951, vol.
при 20 °С, быстро вливают 0,2 мл гемолизата, 6, p. 413; Vella F.— Nature, 1959, vol. 184, p. 272.
сильно взбалтывают в водяной бане в течение
10 с, затем включают секундомер. Через 1 мин
добавляют 6,8 мл раствора сульфата аммония. 3.2.3. Патологические формы
Смесь хорошо Перемешивают, переворачивая
гемоглобина
пробирку до 6 раз, и затем фильтруют через
двойной слой обеззоленных фильтров. На фильт- К настоящему времени известно, более 200
ре остается гемоглобин А, а фильтрат содержит форм патологических гемоглобинов, отличаю-
гемоглобин F, который определяют спектроско- щихся от нормальных структурой полипептид-
пически в тех же условиях, что и раствор общего ной цепи глобина, когда одна или несколько
гемоглобина. аминокислот заменены другими или отсутст-
Проводят также и «холостой» опыт — оп- вуют,
ределяют экстинкцию смеси 3,2 мл 1/12 н. едкого Наиболее частой наследственной патологией
натра, 6,8 мл раствора сульфата аммония н является гемоглобинопатия S (серповиднокле-
0,2 мл воды. точная анемия), которая может быть подтвер-
Расчет проводят по формуле: ждена пробами на серповидность эритроцитов
(см. 3.3.2). Исследование патологических гемо-
глобинов является трудоемким и проводится в
специализированных лабораториях.




109
3.3. ЭРИТРОЦИТЫ

Эритроциты — наиболее многочисленные в горизонтальном положении 1 мин (для оседа-
форменные элементы крови, основное содержи- ния эритроцитов).
мое которых составляет гемоглобин. Мембрана Для подсчета эритроцитов, не меняя гори-
клеток имеет двойной слой липидных и белко- зонтального положения камеры, помещают ее
вых компонентов и содержит большой набор на столик микроскопа и с помощью малого уве-
ферментов. Зрелые эритроциты человека и мле- личения микроскопа (объектив 8Х, окуляр
копитающих двояковогнутой формы, не имеют 10Х) находят верхний левый край сетки (для
ядра. Эритроциты обладают антигенными свой- лучшего контрастирования следует опустить
ствами, участвуют в гемостазе, но основная роль конденсор и прикрыть диафрагму). Счет произ-
их — снабжение тканей кислородом и участие водят в 5 больших квадратах, разделенных на 16
в транспорте углекислоты. малых, т. е. в 80 малых квадратах. Рекоменду-
ется считать клетки в квадратах сетки, располо-
женных по диагонали. Для того чтобы одни и те
3.3.1. Подсчет количества же эритроциты, лежащие на линиях, не попали
дважды в счет, принято для каждого квадрата,
В качестве унифицированных методов под- кроме элементов, лежащих внутри квадрата,
счета эритроцитов в крови приняты два метода; считать расположенные на определенных двух
подсчет в счетной камере и в автоматическом линиях (например, на левой и верхней).
счетчике. Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови
Унифицированный метод подсчета в счетной производят, исходя из разведения крови (200),
камере (1972). П р и н ц и п . Подсчет эритроци- числа сосчитанных квадратов (80) и объема
тов под микроскопом в определенном количе-
I малого квадрата ( мюп , последующей
стве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл
крови, исходя из объема квадратов и разведе-
формуле:
ния крови.
Р е а к т и в ы. 0,9 % раствор хлорида натрия
или раствор Гайема: ртуть хлористая 0,5 г, на-
трия сульфат 5 г, натрия хлорид 1 г, вода ди-
стиллированная до 200 мл.
Специальное оборудование. где X — число эритроцитов в 1 мкл крови; а —
1. Счетная камера Горяева. 2. Микроскоп. число сосчитанных эритроцитов.
Х о д и с с л е д о в а н и я . Разводят иссле- В результате сокращения Х = а-10 000.
дуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую про- Подсчет эритроцитов в счетной камере явля-
бирку отмеривают 4 мл реактива 1 или 2. Пипет- ется трудоемким и недостаточно точным мето-
кой набирают 0,02 мл крови. Кончик пипетки вы- дом. На результатах подсчета сказываются ма-
тирают фильтровальной бумагой или марлей и лейшая неточность при взятии крови в пипетку,
кровь выдувают на дно пробирки; пипетку тща- неудовлетворительная градуировка пипеток, не-
тельно промывают в верхнем слое жидкости, равномерное заполнение камеры, любое отклоне-
повторно набирая ее и выдувая в пробирку, ние от правил подготовки счетной камеры, ее
содержимое пробирки перемешивают и остав- заполнения и подсчета клеток.
ляют стоять до момента счета (рекомендуется Унифицированный метод автоматического
считать эритроциты в ближайшие 2—3 ч после подсчета эритроцитов (1972) с помощью счет-
взятия крови, а при гемолитических и В12-дефи- чика форменных элементов облегчает выполне-
цитных анемиях — сразу после взятия, так как ние этого исследования и делает его более произ-
эритроциты могут разрушиться). Недопустимо водительным. Отечественный гематологический
оставлять взятую кровь с несосчитанными эри- комплекс КГ-2, а также многочисленные зару-
троцитами на следующий день, так как эритро- бежные образцы—«Пикоскел» (ВНР), «Tur»
циты частично разрушаются. (ГДР), «Celloscope» (Швеция), "Cell-Counter»
Подготавливают счетную камеру: протирают (ФРГ), СС-1006 (Япония) и др.— предусматри-
насухо камеру с сеткой и покровное стекло, за- вают в своей программе подсчет количества
тем покровное стекло притирают к камере, слегка эритроцитов в крови.
надавливая на стекло таким образом, чтобы по Помимо счетчиков форменных элементов,
краям его появились радужные полосы (это сви- подсчет эритроцитов включен в программу всех
детельствует о требуемой высоте камеры — существующих гематологических автоматов:
0,1 мм). «SMA-7a», "Гемалог-8» фирмы «Technicon»
Заполняют счетную камеру разведенной (США), «Coulter Counter S» фирмы «Coult-
кровью: предварительно несколько раз тщатель- ronics France SA» (Франция) и др.
но встряхивают содержимое пробирки, затем При использовании счетчиков разведение
пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой крови (подготовка пробы для подсчета) осуществ-
отбирают каплю разведенной крови и подносят ляется вручную. При использовании гематологи-
ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы ческих автоматов отбор пробы крови и ее разве-
она равномерно без пузырьков воздуха запол- дение происходят автоматически.
нила всю поверхность камеры с сеткой, не зате- П р и н ц и п работы большинства счетчиков
кая в бороздки. Заполненную камеру оставляют основан на кондуктометрическом методе. Опреде-

110
3.3,2. Исследование морфологии
ленное количество разведенной изотоническим
раствором натрия хлорида или другим электро- эритроцитов
литом крови пропускают через микроотверстие.
Проходящая клетка увеличивает сопротивление
Морфологию эритроцитов можно исследо-
между электродами, возникающий импульс пе-
вать в световом микроскопе в нативных препа-
редается на счетное устройство с цифровой ин-
ратах и в окрашенных мазках крови. В клини-
дикацией.
Х о д и с с л е д о в а н и я соответствует ин- ческой практике морфологию эритроцитов обыч-
струкции, приложенной к прибору. но исследуют в окрашенных мазках крови,
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . Количест- Приготовление мазков крови унифицирован-
ным методом (1979). Мазки крови готовят на
во эритроцитов в крови, по данным В. В. Соко-
лова, а также И. 6А. Грибовой (1979), состав- предметных стеклах, которые предварительно
ляет | 2 4-10 6 —5,1-10 в 1 мкл6 (4-10 | 2 /л—5,1 X моют и обезжиривают.
Х10 /л) у мужчин и 3,7-10 —4,7-10 6 в 1 мкл Подготовка стекол. Реактивы. 1. Хозяйствен-
(или 3,7-10 1 2 /л — 4,7-10 12 /-") у женщин. ное мыло — 2 % раствор или раствор стирального
порошка: 20 г растворить в 975 мл воды и доба-
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение
вить 20 мл пергидроля. 2. Смесь Никифорова:
числа эритроцитов в крови является одним из ос-
равные части этилового спирта % % и диэтило-
новных лабораторных критериев анемии. Однако
вого эфира.
степень эритроцитопении широко варьирует при
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е не
разных формах малокровия. Так, при наиболее
требуется.
распространенном заболевании — железодефи-
Х о д о б р а б о т к и с т е к о л . Стекла (но-
цитной анемии на почве хронических кровопо-
вые и бывшие в употреблении) помещают в эма-
терь — количество эритроцитов может быть 6 нор-
лир9ванную посуду в 2 % раствор хозяйствен-
мальным или нерезко сниженным (3-10 —
3,6-106 в 1 мкл, или 3-10 |2 /л —3,6-10 12 /л). ного мыла или стирального порошка на 8—10 ч.
Кипятят в указанном растворе 5—10 мин, ста-
При острой кровопотере, Вп-дефицитной анемии
рые мазки предварительно стирают ветошью или
(в стадии рецидива), гипопластической анемии,
ватным тампоном. Более длительное кипячение
гемолитических анемиях (в период криза) число
или использование алюминиевой посуды не ре-
эритроцитов в крови может значительно сни-
зиться и достигнуть 1 • 106 в 1 мкл, или I • 10 |2 /л комендуют, так как стекла мутнеют. Промывают
в проточной воде. Насухо вытирают и помещают
и менее.
в смесь Никифорова на 30—60 мин. Насухо вы-
Повышение количества эритроцитов в кро-
тирают чистым полотенцем и хранят в широко-
ви — эритроцнтоз — может быть обусловлен
многими причинами. Значительный эритроцитоз горлой чистой посуде с притертой пробкой. Чи-
(6,5-106-8,5-106 в 1 мкл, или 6,5.10' 2 /л- стые стекла рекомендуется брать либо пинцетом,
8,5-10' 2 /л крови) является одним из важных либо за края (соприкосновение пальцев с по-
верхностью стекла оставляет жирные следы).
лабораторных симптомов эритремии. Другие ге-
Техника приготовления маз-
мобластозы миелопролиферативной природы
к о в . На сухое подготовленное описанным выше
(сублейкемический миелоз или миелофиброз и
способом предметное стекло наносят мазок кро-
хронический миелолейкоз) реже сопровождают-
ви следующим образом. На стекло ближе к ко-
ся эритроцитозом и только в начальной стадии
роткой стороне наносят стеклянной палочкой
заболевания.
(или непосредственно из места укола пальца)
Вторичный (симптоматический) эритроцитоз
небольшую каплю крови. Оставляют стекло в го-
может сопутствовать широкому кругу различ-
ризонтальном положении и размазывают каплю
ных заболеваний и бывает абсолютным (связан-
крови по стеклу с помощью чистого шлифован-
ный с усилением нормального эритропоэза) и от-
ного стекла, помещая его под углом 45°; корот-
носительным (гемоконцентрационный). Абсо-
ким ребром, подождав, пока вся кровь расплы-
лютные эритроцитозы сопутствуют хроническим
вется по нему, быстро проводят по предметному
обструктивным заболеваниям легких, врожден-
стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло,
ным порокам сердца, первичной легочной гипер-
так как при этом травмируются форменные
тензии, синдрому Пиквика, наследственным ге-
элементы крови.
моглобинопатиям, гнпернефроидному раку, ге-
Мазки высушивают на воздухе и маркируют
мангиобластоме мозжечка, гепатоме, гормо-
(лучше простым карандашом). Высохший мазок
нально-активным опухолям, заболеваниям, со-
провождающимся стенозом почечных артерий, должен быть равномерно тонким, желтоватого
заболеваниям ЦНС и др. Вторичные относитель- цвета, достаточной величины (располагаться на
ные эритроцитозы связаны с нарушением гемо- I—1,5 см от краев, занимать почти всю длину
концентрации и характеризуются нормальным стекла) и оканчиваться «метелочкой>. Толстые
(густо-розового цвета) мазки не следует ис-
объемом циркулирующих эритроцитов при сни-
жении массы циркулирующей крови и массы пользовать, так как в них морфология клеток
циркулирующей плазмы. плохо различима.
Более качественные мазки крови получаются
при использовании автоматических устройств:
cHemaprep» фирмы «Oplon» (ФРГ), «Slide
Л и т е р а т у р а . Грибова И. А. Гематоло-
Spinner» фирмы «Corning Scientific Instru-
гическая норма.— В кн.: Руководство по гема-
тологии / Под ред. А. И. Воробьева, Ю. И. Ло- ments:» (США) и др., предназначенных для при-
рие. М.: Медицина, 1979, с. 53. готовления мазков. Благодаря такому устрой-

111
ству мазки получаются равномерные и имеют О к р а с к а п о П а п п е н г е й м у . Сухие
стандартные размер и толщину. нефиксированные мазки помещают в кювету
Фиксация и окраска мазков унифицирован- с раствором Мая—Грюнвальда на 3—5 мин (или
ным методом (1979). В качестве унифицирован- наливают на.мазок, помещенный на «рельсы»
ных приняты методы окраски по Нохту и Пап- высоким слоем). Контейнер с мазками ополас-
пенгейму. кивают в кювете с дистиллированной водой (или
Реактивы для фиксации: метиловый спирт на мазок, помещенный на «рельсы», не сливая
х. ч. или раствор эозинметиленового синего по краситель, добавляют дистиллированную воду
Маю — Грюнвальду. на 1 мин). Помещают контейнер с мазками в
Реактивы для окраски мазков кювету с азур-эозиновой краской по Нохту (или
по Н о х т у . 1. Основной раствор азура II: 1 г наливают на мазок краску) на 8—15 мин. Смы-
краски растворяют в 1000 мл дистиллированной вают краску водопроводной водой. Мазки высу-
воды. Оставляют в посуде из темного стекла на шивают на воздухе.
12—14 дней при комнатной температуре, после Окраска по Романовскому—
чего используют. 2. Основной раствор эозина Г и м з е производится так же, как и по Нохту;
калия: 1 г краски растворяют в 1000 мл дистил- в качестве красителя используют готовый раст-
лированной воды. Оставляют в посуде из тем- вор Романовского—Гимзы, который перед упот-
ного стекла при комнатной температуре на 12— реблением разводят из расчета 1 капля краски
14 дней, затем используют. 3. Фосфатный буфер на 1 мл дистиллированной воды. Время окраски
(смесь Вейзе) рН 7,4—7,5: смешивают 0,49 г ка- устанавливают опытным путем для каждой но-
лия фосфата однозамешенного безводного вой партии красителя (25—40 мин).
(КН2РО4) и 0,909 г натрия фосфата двузаме- А в т о м а т и ч е с к а я о к р а с к а маз-
щенного безводного. (Na2HPO4 и дистиллиро- к о в может . быть осуществлена с помощью
ванной воды 1000 мл. 4. Рабочий раствор азур- специальных устройств: «Hematek» фирмы
эозина: перед употреблением смешивают 25 мл «Ames» (США), WL-600 фирмы «Veb Kombinat
основного раствора азура II, 20 мл основного Medirin und Labortechnik» (ГДР) и др., в кото-
раствора эозина калия и 55 мл буферного раст- рые ручным способом загружают нефиксирован-
вора (пропорции красителей могут варьировать, ные мазки. Последующее автоматическое дози-
их устанавливают опытным путем при приготов- рование красителей и буферных растворов обес-
лении свежих партий основных растворов). печивает стандартную и равномерную окраску
Р е а к т и в ы для о к р а с к и м а з к о в мазков.
по П а п п е н г е й м у . 1. Раствор эозин-метиле- Исследование морфологии эритроцитов.
нового синего по Маю — Грюнвальду. При от- П р и н ц и п . Исследование окрашенных мазков
сутствии готового раствора красителя его можно крови с помощью иммерсионной системы микро-
приготовить, растворив 1 г сухого красителя скопа.
в 1000 мл метилового спирта. Раствор готов к Специальное оборудование.
употреблению через 4 дня. 2. Рабочий раствор Микроскоп.
азур-эозина по Нохту. Реактивы. 1. Иммерсионное масло.
2. Диэтиловый эфир.
Специальное оборудование.
Кювета для фиксации и окраски мазков со шта- Х о д и с с л е д о в а н и я . Предметное стек-
тивом-контейнером (при отсутствии используют ло с окрашенным, высохшим на воздухе мазком
эмалированные лотки с установленными для крови помещают на столик микроскопа и с по-
стекол «рельсами» из пары стеклянных палочек, мощью малого увеличения (окуляр 7Х, объек-
соединенных резиновыми трубками). тив 8Х) находят край мазка. Не меняя положе-
Ф и к с а ц и я м а з к о в . Фиксатор мазков ния стекла, наносят каплю иммерсионного масла
наливают либо в кювету, либо в широкогорлую на край мазка на место, расположенное под
посуду с притертой пробкой. Высушенные на объективом. Переводят иммерсионный объектив
воздухе мазки помещают в контейнер, который в положение, вертикальное к мазку, при этом
опускают в кювету с фиксатором (или кладут по объектив погружается в каплю масла.
одному в посуду) на 5—10 мин. Вынимают кон- Осторожно слегка вращают макровинт до
тейнер со стеклами из кюветы (или вынимают появления изображения в поле зрения микро-
пинцетом стекла и устанавливают в штативе), скопа. Затем с помощью микровинта устанавли-
оставляют на воздухе до полного высыхания. вают четкую видимость препарата (критерием
О к р а с к а п о Н о х т у . Высохшие фикси- правильно подобранного для каждого глаза фо-
рованные мазки, не вынимая из контейнера, по- кусного расстояния будет ясное изображение
мещают в кювету с рабочим раствором краски клеток с четкими границами и внутриклеточной
на строго определенное время, подобранное для структурой). После установки микроскопа при-
каждой партии красителя (от 20 до 45 мин). При ступают к исследованию морфологии эритроци-
отсутствии кюветы с контейнером стекла поме- тов, обращая внимание на форму, размеры кле-
щают горизонтально на «рельсы» (мазком квер- ток, интенсивность их окраски, наличие внутри-
ху) и наливают высокий слой (3—4 мл на мазок) клеточных включений и пр. Поскольку клетки
рабочего раствора краски. Вынимают контейнер имеют определенный объем, для лучшего их
со стеклами из кюветы с красителем и поме- рассмотрения надо постоянно менять фокусное
щают его в кювету с водопроводной водой (при расстояние с помощью микровинта.
отсутствии кюветы краску со стекол смывают, Для получения полного представления о мор-
не снимая их с «рельсов», водопроводной водой). фологии эритроцитов необходимо просмотреть
Высушивают мазки на воздухе. несколько полей зрения, передвигая мазок либо

112
Т а б л и ц а 24. Характеристика эритроцитов при некоторых формах анемий
Эритроциты Ретику ло- Ядерные
Цветовой
Формы анемий
циты .формы
показатель форма объем
диаметр

Гипохромия Пойкилоци- Микроциты
Железодефицит- Нормаль- Нормаль- Отсутствуют
ные ты ный или ные или
снижен снижены
Часто мега-
Макроцнты, Резко по-
>
Гиперхро- Снижены
В is- и фолиеводе-
лобласты,
мня
фицитные мегалоциты вышен
нормоблас-
ты
>
Ги попла стические Макроциты Нормаль-
Нормохро- Резко сни- Часто нор-
мия ный или по- жены мобласты
i
вышен
Гемолитические:
> Микроциты Повышен
наследственный Сфероциты Резко повы- То же
шены
ми кросфе роцитоз
»
талассемия Гипохромня Мишене- Повышены
Снижен Единичные
вндные нормоблас-
ты



рукой, либо с помощью крестообразного устрой- микроцитозом (табл. 24). Гипохромия эритро-
ства. Рассматривать морфологию эритроцитов цитов сопутствует и более редким формам мало-
надо только в тонких местах мазка, где эритро- кровия, не связанным с дефицитом железа;
циты расположены одиночно, не образуют «мо- свинцовому отравлению, талассемии и другим
нетных столбиков>. наследственным повреждениям эритроцитов.
По окончании микроскопии с .помощью мак- Следует иметь в виду, что гипохромия эритро-
ровиита поднимают тубус микроскопа, снимают цитов может наблюдаться не только при сни-
стекло с предметного стекла, стирают масло жении концентрации гемоглобина и числа эри-
с иммерсионного объектива н предметного стек- троцитов в крови, но и при нормальных коли-
чественных показателях. Реже встречается уси-
ла марлей, смоченной эфиром,
ленная окраска эритроцитов — гиперхролмия,
У здоровых людей эритроциты имеют при-
связанная с повышенным насыщением эритро-
мерно одинаковый размер. Для более точного
цитов гемоглобином и сочетающаяся с увели-
представления о размере клеток проводят эрнт-
роцитометрию— измерение диаметра эритроци- ченным их размером — макроцитозом, мегало-
тов (см. 3.3.3). Эритроцит имеет форму двояко- цитозом. Эти изменения эритроцитов характер-
вогнутого диска. В окрашенных препаратах ны для дефицита таких факторов кроветворения,
как витамин Ви, фолиевая кислота, и наблю-
эритроциты круглой формы, розового цвета. Ок-
сифилия клетки обусловлена присутствием гемо- даются при анемии Аддисона — Бирмера, дифил-
лоботриозе, органических заболеваниях желуд-
глобина, поэтому по интенсивности окраски
ка, кишечника, алкоголизме, беременности и др.
можно судить о степени насыщенности эритро-
Изменение окраски в виде полихроматофилии
цитов гемоглобином. Эритроциты здоровых лю-
(эритроциты сероватого цвета) обусловлено
дей имеют равномерную окраску и небольшое
окраской кислыми и основными красителями.
просветление в центре (нормохромня).
В норме встречаются единичные полихромато-
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Измене-
фильные эритроциты. Их число повышается при
ния морфологии эритроцитов в виде появления
эритроцитов разного размера (анизоцитоз), усиленном эритропоэзе (постгеморрагнческие
разной формы (пойкилоцитоз), разной окраски анемии, гемолитические анемии и др.).
(анизохромия) являются важными морфологи- При талассемни и других формах малокро-
ческими симптомами различных форм анемии. вия встречаются так называемые мишеневидные
Наиболее часто наблюдается бледная окрас- эритроциты — с окрашенным участком в центре
клетки на фоне неокрашенной зоны.
ка эритроцитов с более широкой неокрашенной
Появление базофильной пунктации в эритро-
центральной частью — гипохромия эритроцитов,
цитах связано с патологическим кроветворением
которая обусловлена низким насыщением эрит-
и характерно для свинцового отравления, но
роцита гемоглобином и характерна для распро-
встречается при других формах анемии. Эритро-
страненных форм малокровия, связанных с де-
фицитом железа (постгеморрагические анемии, циты с ядром — нормобласты, эритробласты —
анемии беременных, при опухолях, сепсисе и встречаются в мазках крови при различных
анемиях. Большое количество нормобластов ха-
других тяжелых инфекционных заболеваниях,
рактерно для гемолитических анемий, метаста-
заболеваниях желудочно-кишечного тракта и
пр.). При этом гипохромия, как правило, соче- зов опухоли в костный мозг. Гигантские ядерные
эритроциты — мегалобласты — свидетельствуют
тается с уменьшением размера эритроцитов —

113
о патологическом кроветворении, связанном с рометра, совпадающих с тем или иным коли-
дефицитом витамина В12, фолиевой кислоты. чеством делений шкалы объект-микрометра, 'и
определяют цену одного деления. Например:
При этих же.состояниях наблюдаются и эритро-
40 делений шкалы окуляр-микрометра совпали
циты с остатками ядер — кольца Кебота, тельца
с б делениями объект-микрометра, т. е. соот-
Жолли. Последние формы постоянно обнаружи-
вают в мазках крови У| больных после удаления - 60
ветствуют 60 мкм; одно деление -г^.= 1,5 мкм.
селезенки.
Шаровидная форма эритроцитов, отличаю- Это определение проводят один раз для опреде-
щаяся уменьшенным диаметром и интенсивной, ленного микроскопа, с помощью которого в
без просветлений окраской, — микросфероци- дальнейшем производят эритроцитометрию.
тоз — является патогномоиичным морфологиче- На сухой окрашенный мазок наносят каплю
ским признаком гемолитической анемии — на- иммерсионного масла, погружают в нее иммер-
следственного микросфероцитоза (см. табл. 24). сионный объектив и микроскопируют с макси-
В небольшом количестве микросфероциты могут мально освещенным полем зрения.
встречаться и при других гемолитических ане- В тонком месте мазка (где эритроциты рас-
миях. положены изолированно) измеряют, диаметр не
Большое диагностическое значение имеет об- менее 100 эритроцитов, отмечая, какое коли-
наружение в мазках крови эритроцитов серпо- чество делений шкалы окуляр-микрометра укла-
видной формы. Этот симптом характерен для дывается в эритроцит. Отмечают результат из-
серповидноклеточной анемии, относящейся к мерения каждого эритроцита (удобно пользо-
группе наследственных гемоглобинопатии (S-гe- ваться 11-клавишным счетчиком, условно ис-
моглобиноз). пользуя разные клавиши для определенного
В сомнительных случаях, когда число серпо- числа делений шкалы).
видных эритроцитов в мазках невелико, сле- Зная цену одного деления и количество эрит-
дует проводить пробы на серповидность эритро- роцитов с одинаковым числом делений, выража-
ют результат в процентах.
цитов, основанные на использовании веществ
(метабисульфит натрия, янусовый зеленый, ме- П р и м е р : эритроциты с диаметром 4,5 мкм —
5 %, 6 мкм — 10 %, 7,5 мкм — 70 %, 9 мкм -
тиленовый синий), понижающих содержание
кислорода в препаратах. 11 %, 10,5 мкм — 4 %. Результат можно пред-
На стекле смешивают каплю крови и каплю ставить и в виде эритроцитометрической кривой
одного из указанных веществ, накрывают по- (кривая Прайс-Джонса), при этом на оси абс-
кровным стеклом. Просматривают под микро- цисс откладывают диаметр в микронах, а на оси
скопом через 10—15 мин, затем 24—48 ч. В по- ординат — процент эритроцитов. При необходи-
ложительных случаях в препаратах количество мости результат выражают в виде среднего
эритроцитов серповидной формы увеличивается. диаметра эритроцитов (см. 3.3.5).
Определение с помощью счетного аппарата.
Л и т е р а т у р а . Циркина А. С.— В кн.;
В счетном аппарате «Целлоскоп» и др. можно
Справочник по клиническим лабораторным ме-
подсчитать число частиц определенного размера
тодам исследования/Под ред. Е. А. Кост. 2-е
в 1 мкл жидкости.
изд.— М.: Медицина, 1975, с. 17.
П р и н ц и п . Подсчет эритроцитов разного
диаметра в 1 мкл крови с помощью дискримина-
тора и при необходимости построение эритро-
3.3.3. Эритроцитометрия цитометрической кривой.
(измерение- диаметра эритроцитов) Х о д о п р е д е л е н и я соответствует ин-
струкции, приложенной к прибору.
Унифицированный микроскопический метод с При сопоставлении эритроцитометрических
помощью окуляр-микрометра (1972). П р и н - кривых, построенных после подсчета в аппарате
и с помощью окуляр-микрометра у здоровых
ц и п . Измерение диаметра эритроцитов в окра-
шенном мазке крови с помощью окуляр-микро- людей, обнаружено их совпадение. При патоло-
гии, особенно при различных анемиях, циррозах
метра.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1. печени, гемолитических кризах, выявлены раз-
Микроскоп. 2. Окуляр-микрометр — окуляр, на- личия в форме и высоте кривых. Это может быть
саживаемый на тубус микроскопа, с круглой связано прежде всего с тем, что эритроцито-
стеклянной пластинкой и нанесенной на ней метрическая кривая после использования оку-
ляр-микрометра выведена на 100 эритроцитов,
шкалой, разделенной на 50 делений. 3. Объект-
микрометр — предметное стекло со шкалой дли- а в счетном аппарате — на абсолютные вели-
ной 2 мм, разделенной на 200 делений (каждое чины эритроцитов в 1 мкл крови; кроме того, не
исключено, что при патологии в морфологически
деление 10 мкм).
измененных эритроцитах изменяются свойства
Х о д о п р е д е л е н и я . Перед началом ра-
электропроводности, на принципе которой осно-
боты определяют цену одного деления шкалы
вано исследование эритроцитов во многих счет-
окуляр-микрометра,, которая зависит от длины
ных приборах.
тубуса микроскопа и увеличения объектива. Оп-
ределение проводят с помощью объект-микро- Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро-
метра, который устанавливают на столик микро- вых нормоциты (эритроциты диаметром 7,5 мкм)
скопа таким образом, чтобы шкалы окуляр-ми- составляют 68 ±0,4%, микроциты (диаметр
крометра и объект-микрометра сбвпалн. Затем 6,9 мкм и меньше) — 15,3±0,42 % и макроциты
отсчитывают число делений шкалы окуляр-мик- (диаметр 8 мкм и больше) — 16,9±0,47 %.

114
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Резуль- дующим определением результата по градуиро-
таты эрнтроцитометрии являются важными для ванным капиллярам.
уточнения характера анемии (см. табл. 24). Р е а к т и в ы те же.
При железодефицитной анемии, как правило, О б о р у д о в а н и е . 1. Центрифуга. 2. Пи-
имеют место микроцитоз эритроцитов до 30—50 % петки от аппарата Панченкова (с отрезанным
и соответственно сдвиг эритроцитометрической верхним концом и длиной 10—11 см).
кривой влево. Увеличение процента микроцитов Х о д о п р е д е л е н и я . В обработанную
наблюдается также при наследственном мнкро- антикоагулянтом и высохшую пипетку набирают
сфероцитозе, талассемии, свинцовом отравле- кровь из пальца (или венозную) до верхней мет-
нии. Увеличение числа макроцитов является ки (100 делений). Пипетку укупоривают, обтя-
признаком макроцитарной анемии, наблюдаю- гивая ее резиновым кольцом, и центрифугируют
щейся при В[2-дефицитных и фолиеводефицит- 30—40 мин при. 3000 об/мин. Результат отме-
ных состояниях. Количество макроцитов при чают по градуировке капилляра, вычитая из 100
этих анемиях может достигать 50 % и более, высоту столбика эритроцитов.
при этом в небольшом числе (1—3 %) обнару- Определение с помощью автомата. Иссле-
живают и мегалоциты (эритроциты с диаметром дование гематокрита входит в программу всех
12 мкм и более). Макроцитоз эритроцитов может известных гематологических автоматов и многих
наблюдаться независимо от анемии при алко- счетных приборов.
голизме, диффузных поражениях печени. П р и н ц и п . В автоматах используется кон-
дуктометрический метод (автомат SMA-7a)
Л и т е р а т у р а . Гольдберг Д. И., Гольд-
либо центрифужный метод (автомат «Гемалог-
берг Е. Д. Справочник по гематологии. 6-е
8"). В некоторых автоматах н счетных приборах
изд.— Томск, 1980, с. 72.
гематокрит определяют расчетным путем, исходя
из количества эритроцитов в 1 мкл крови 3и сред-
него объема одного эритроцита в 1 мкм .
3.3.4. Общий объем эритроцитов
Х о д и с с л е д о в а н и я соответствует ни-,
(гематокритная величина)
струкции, приложенной к прибору.
Гематокритная величина, или показатель ге- Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро-
матокрита, дает представление о соотношении вых гематокрит венозной и капиллярной крови
между объемами плазмы и форменных элемен- равен 40—48 % (или 0,40—0,48) для мужчин
тов крови (главным образом эритроцитов), по- и 36—42 % (или 0,36—0,42) для женщин.
лученном после центрифугирования крови. При- К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Показа-
нято гематокритнои величиной выражать объем тель широко используют для суждения о степени
эритроцитов. В качестве унифицированных ме- анемии, при которой, как правило, отмечается
тодов определения гематокритнои величины (ге- его снижение, иногда до значительных цифр
матокрита) утверждены два метода: с помощью (20—25%). Выраженное повышение (55—65%)
микроцентрифуги и микрометод в модификации характерно для эритремии, менее резкое увели-
И. Тодорова. чение (50—55 %) наблюдается при симптома-
Унифицированный метод с помощью мнкро- тических эритроцитозах, сопутствующих вро-
цеитрнфуги (1979). П р и н ц и п . Центрифуги- жденным порокам сердца, легочной недостаточ-
рование крови определенное время при постоян- ности, некоторым гемоглобинопатиям. Показа-
ном числе оборотов центрифуги с последующим тель гематокрита дает представление о гемокон-
определением результата по специальной шкале. центрационных сдвигах, он снижается при гемо-
Р е а к т и в ы . Антикоагулянты: гепарин — дилюции. Используют гематокрнт для расчетных
5000 ЕД/мл разводят дистиллированной водой показателей, отражающих различные характе-
в соотношении 1 : 5 или этилендиаминтетраук- ристики эритроцитов: средний объем, средняя
сусной кислоты динатриевая соль (ЭДТА Na2, концентрация гемоглобина (см. ниже), а также
трнлон Б), 40 г/л. для ряда биохимических показателей.
О б о р у д о в а н и е . 1. Микроцентрифуга Л и т е р а т у р а . Тодоров Я. Клинические
МЦГ-8. 2. Капиллярные трубки (в комплекте
лабораторные исследования в педиатрии. 3-е
с центрифугой). Можно использовать капил-
изд.— София, 1961, с. 263.
ляры для определения С-реактивного белка.
Х о д о п р е д е л е н и я . Предварительно
обработанный антикоагулянтом и высушенный 3.3.5. Индексы эритроцитов
капилляр заполняют кровью из пальца (или ве-
7
нозной) на /8 длины. Укупоривают капилляр В клинической практике используют различ-
с одного конца специальной пастой (можно ные расчетные характеристики, отражающие
пластилином). Помещают в ротор центрифуги физико-химические свойства эритроцитов. Наи-
так, чтобы укупоренные концы упирались в ре- более широко применяют расчет цветового по-
зиновую прокладку, и центрифугируют 5 мин казателя.
при 8000 об/мин. По отсчетной шкале, прило- Цветовой показатель. Индекс отражает от-
женной к центрифуге МЦГ-8, определяют гема- носительное содержание гемоглобина в эритро-
токритную величину. цитах. Вычисляют цветовой показатель опреде-
Унифицированный микрометод (модифика- лением отношения двух частных, полученных от
ция Я. Тодорова) (1979). П р и н ц и п . Цент- деления количества гемоглобина на количество
рифугирование крови определенное время при эритроцитов в норме и в исследуемой крови по
постоянном числе оборотов центрифуги с после- следующей формуле:

115
центрации гемоглобина в I мкл крови на число
эритроцитов в том же объеме.
Пример: концентрация гемоглобина в крови
равна 12 г/100 мл, количество эритроцитов в
1 мкл крови — 4 000 000 .
12 г % = 12000 мг/100 мл=12 мг в 1 мкл =
нормальное количество эритроцитов.
Если принять, что в норме в 100 мл крови со-
держится 16,7 % гемоглобина и 5000000 эрит-
роцитов в 1 мкл крови, то рассчитывают по фор-
муле:

надо содержание гемоглобина в г/100 мл умно-
жить на 10 и разделить на число миллионов
эритроцитов в крови. Расчет показателя можно
произвести по номограмме (по Мазону). В сов-
ременных гематологических автоматах этот по-
казатель (МСН)' определяют расчетным путем.
Нормальные величины составляют 24—33 пг.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение
В практической работе удобно пользоваться отражает гипохромию и наблюдается при желе-
для подсчета цветового показателя пересчет- зодефицитных анемиях, повышение имеет место
ными таблицами, а также номограммами. при макроцитарных и особенно мегалоцитарных
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро- анемиях.
вых цветовой показатель находится в пределах
Л и т е р а т у р а . Тодоров Я. Клинические
0,86—1,05.
лабораторные исследования в педиатрии. 3-е
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . П о вели-
изд., русск.—София, 1961, с. 272.
чине цветового показателя принято делить ане-
мии на гипохромные, иормохромные и гипер- Средняя концентрация гемоглобина в эрит-
хромные. Гипохромные анемии (с цветовым по- роците. Показатель отражает степень насыще-
казателем менее 0,86} широко распространены ния эритроцита гемоглобином в процентах. Вы-
н наблюдаются прежде всего при дефиците же- числяют путем деления концентрации гемогло-
леза, вызванном различными причинами. Осо- бина в г/100 мл на гематокритную величину и
бенно выраженной гипохромией (0,6 — 0,5 и умножения на 100.
ниже) характеризуются железодефицитные ане- Пример: концентрация гемоглобина
мии, обусловленные хроническими кровопоте- 12 г/100 мл, гематокрит 40 об. %.
рями. Средняя концентрация . гемоглобина
Менее выраженная гипохромия эритроцитов
(0,7 — 0,8) наблюдается при железодефицитной
анемии беременных, при инфекциях, опухолях,
Редко встречаются гипохромные анемии, не свя- Можно легко рассчитать, используя номо-
занные с дефицитом железа и обусловленные грамму по Мазону (рис. 6). Показатель включен
нарушением синтеза гемоглобина в результате в программу современных гематологических ав-
свинцового отравления или наследственного по- томатов.
вреждения синтеза порфиринов и цепей глобина Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . МСНС ко-
(b-талассемии, а-талассемии н др.). леблется в пределах 30—38 %. Величина наибо-
Повышение цветового показателя — гипер- лее константная, насыщения выше 38 % не
хромия — является характерным лабораторным бывает.
признаком различных Виг-дефицитных и фолие- К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение
водефицитных анемий. Особенно выражена ги- показателя отражает абсолютную гипохромию
перхромия эритроцитов (1,2 — 1,3) при рецидиве и является характерным для железодефицитных
анемии Аддисона — Бирмера. Нормохромные анемий. Чувствительность этого индекса эритро-
анемии наблюдаются при некоторых гемолитиче- цитов при железодефицитных анемиях состав-
ских формах малокровия, острых кровопотерях, ляет 85 %. Снижение показателя выявлено так-
лейкозах, сопутствуют циррозу печени. же при макроцитарных и особенно мегалоцитар-
Среднее содержание гемоглобина в эритро- ных анемиях, когда объем эритроцитов увеличен
ците. Показатель отражает абсолютное содер- непропорционально более значительно по срав-
жание гемоглобина в одном эритроците в пико- нению с увеличением насыщения эритроцитов
граммах (пг). Определяют путем деления кон- гемоглобином.



1 1
Для выявления гипохромии необходимым МСН — Mean Corpuscular Hemoglobin.
2
условием является правильный подсчет числа МСНС — Mean Corpuscular Hemoglobin
Concentration.
эритроцитов в крови.

116
Рис. 6. Номограмма для вычисления индексов эритроцитов по Мазону [из кн.: М. М, Wintrobe.
Clinical Hematology. Ed. 4.—Filadelphia: Lea Fiebiger, 1956]. Объяснение в тексте.

Л и т е р а т у р а . Тодоров И. Клинические
лабораторные исследования в педиатрии.— Со-
фия, 1966, с. 341.
Средний объем эритроцитов. Показатель яв- Практически для вычисления показателя
ляется важным при диагностике различных надо величину гематокрита разделить на число
форм малокровия. Вычисляют путем деления re- эритроцитов в миллионах н умножить на 10.
матокритной величины на общее количество
эритроцитов в крови. Средний объем эритроци- Можно расчет вести по номограмме.
тов (MCV) ' выражают в кубических микронах В программе современных гематологических
или кубических микрометрах. комплексов и автоматов этот параметр опреде-
П р и м е р : гематокрит — 40 об.% (или ляют либо кондуктометрически (отечественный
0,40 мм3, или 400000000 мкм 3 ); эритроциты гематологический комплекс КГ-2), либо расчет-
4 500 000 в 1 мкл; ным путем.
Нормальные величины составляют 75—
95 мкм3.
' MCV — Mean corpusculare Volume.
П7
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Повыше- непосредственно на стекле или в пробирке
ние показателя наблюдается при наследственном (1972). П р и н ц и п . Суправитальная окраска
микросфероцитозе, макроцитарных и мегалоци- красителями, выявляющими зернисто-ннтчатую
тарных анемиях, особенно высокое значение субстанцию ретикулоцитов.
3
(более 130 мкм ) выявлено при В12-дефицитных Р е а к т и в ы . Можно использовать один из
анемиях. Объем эритроцитов часто увеличен следующих красителей.
при диффузных поражениях печени, алкого- 1. Насыщенный раствор бриллиантового кре-
лизме. Снижение наблюдается при микроци- зилового синего в абсолютном спирте (для при-
тарных анемиях, талассемии. готовления абсолютного спирта надо выдержать
этанол 96 % в нескольких сменах прокаленного
Л и т е р а т у р а . Тодоров И. Клинические
порошка медного купороса). На 100 мл абсолют-
лабораторные исследования в педиатрии.— Со- ного спирта берут 1,2 г краски.
фия, 1966, с. 341. 2. Раствор азура I, предложенный П. Н. Ко-
Средний диаметр эритроцитов. Вычисляют риковым: азур 1 — 1 г, аммония оксалат — 0,4 г,
из результатов эритроцитометрии путем умно- натрия хлорид — 0,8 г, этиловый спирт 96 % —
жения каждого процента клеток с определенным 10 мл, дистиллированная вода — 90 мл. Раствор
диаметром на его значение в мкм, суммирова- краски в закрытом флаконе помещают на 2—3
нием этих произведений н делением на 100. дня в термостат при 37 °С и периодически энер-
П р и м е р : при эритроцитометрии 100 эрит- гично взбалтывают. Затем охлаждают до ком-
роцитов выявлено 10 % эритроцитов с диамет- натной температуры и фильтруют через бумаж-
ром 6 мкм, 70 % — с диаметром 7,5 мкм и ный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из
20 % — с диаметром 9 мкм. темного стекла. При появлении осадка краску
Средний диаметр эритроцитов (СДЭ) вычис- следует снова профильтровать.
ляют следующим образом: 3. Раствор азура II следующего состава:
азур II — 1 г, натрия цитрат — 5 г, натрия хло-
рид — 0,4 г, дистиллированная вода — 45 мл.
Раствор оставляют в термостате при 37 °С на
2 сут, периодически помешивая. Для ускорения
растворения краску можно прогреть на слабом
огне в течение 15—20 мин, не доводя до кипения.
Нормальные величины СДЭ
Охлаждают до комнатной температуры и фильт-
7,55±0,009 мкм.
руют.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Показа-
Хранят в посуде из темного стекла.
тель значительно менее информативен, чем раз-
Специальное оборудование.
вернутые данные эритроцитометрии. Снижение
Микроскоп.
СДЭ наблюдается при резко выраженных же-
Х о д о п р е д е л е н и я . Окраска на стекле.
лезодефицитных анемиях, повышение — при ре-
Хорошо вымытое и обезжиренное предметное
цидиве анемии Аддисона — Бирмера и других
стекло подогревают над пламенем горелки. Стек-
В12Гдефнцитных анемиях.
лянной палочкой наносят на стекло каплю од-
ного из красителей и готовят мазок из краски
шлифованным стеклом. Маркируют сторону
3.3.6. Ретикулоциты
стекла, на которую нанесен мазок краски, стек-
Ретикулоцнты — молодые эритроциты, обра- лографом. В таком виде стекла можно загото-
зующиеся после потери нормобластами ядер. вить впрок и хранить в сухом темном месте.
Характерной особенностью ретикулоцитов явля- Наносят каплю крови на мазок краски, готовят
ется наличие в цитоплазме зернисто-нитчатой из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влаж-
субстанции, представляющей агрегированные ную камеру на 3—4 мин (можно пользоваться
рибосомы и митохондрии. Эта субстанция выяв- чашкой Петри с уложенными по краям валиками
ляется при специальном методе окраски — суп- смоченной ваты или фильтровальной бумаги).
равитальном, т. е. без предварительной фикса- Затем высушивают мазки на воздухе.
В приготовленных таким образом мазках
ции клеток. Зернисто-нитчатая субстанция в
различных рётикулоцитах отличается полимор- эритроциты окрашены в желтовато-зеленова-
физмом; чем клетка моложе, тем субстанция тый цвет, зернисто-нитчатая субстанция — в си-
более обильная. У самых молодых ретикуло- ний цвет.
цитов она имеет форму густого клубка, у более Окраска в пробирке. Метод 1: перед упот-
зрелых клеток выявляется в виде сеточки, от- реблением готовят в пробирке рабочий раствор
дельных нитей и затем отдельных зерен. В маз- бриллиантового крезилового синего из расчета
ках, окрашенных обычными гематологическими на каплю 1 % раствора оксалата калия 4 капли
методами, ретикулоциты серовато-розового цве- раствора краски 1. В краску добавляют 0,04 мл
та — полихроматофильны, т. е. окрашены раз- крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тща-
ными красителями. тельно, но осторожно перемешивают и остав-
Определение количества ретикулоцитов про- ляют на 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие
изводится при микроскопии специально окра- мазки.
шенных мазков. Метод 2: в пробирку помещают 0,05 мл раст-
вора краски 3 и 0,2 мл крови. Смесь тщательно
Унифицированный метод подсчета количест-
перемешивают и оставляют на 20—30 мин. Пе-
ва ретикулоцитов после окраски их бриллиан-
ремешивают и готовят тонкие мазки.
товым крезиловым синим, азуром I или азуром II

118
Метод 3: в пробирку помещают 0,3—0,5 мл бует немного времени; благодаря яркому свече-
раствора краски 2 и 5—6 капель крови пипеткой нию ретикулоциты легко подсчитать.
от аппарата Паиченкова. Пробирку закрывают Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро-
вых число ретикулоцитов составляет 2—12 0 / 0 о,
резиновой пробкой, смесь тщательно, но осто-
или 0,2—1,2 %.
рожно перемешивают и оставляют на I — l ' / 2 ч
(лучше окрашиваются ретикулоциты при экс- К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Число рети-
позиции 1 1/2—3 ч). Перемешивают и готовят кулоцитов в крови отражает регенеративные
тонкие мазки. свойства костного мозга, и оценка его широко
П о д с ч е т р е т и к у л о ц и т о в . В маз- используется при различных анемиях (см.
ках эритроциты окрашены в желтовато-зелено- табл. 24). Повышение количества ретикулоци-
ватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция — в тов наблюдается после кровопотери, при гемо-
синий или синевато-фиолетовый цвет. литических анемиях, особенно в период криза
Приготовленные одним из указанных выше (количество ретикулоцитов может быть 20—
способов мазки микроскопируют с иммерсион- 30 %), а также на фоне лечения анемии Адди-
ным объективом. Необходимо подсчитать не ме- сона—Бирмера витамином В12 (ретикулоци-
нее 1000 эритроцитов и отметить среди них коли- тарный криз — подъем числа ретикулоцитов на
чество эритроцитов, содержащих зернисто-нит- 4—8-й день лечения). Снижение количества
чатую субстанцию. Практически для большей ретикулоцитов характерно для гипопластиче-
точности пользуются специальным окуляром, в ской анемии, редицива анемии Аддисона—
котором можно уменьшить поле зрения до тре- Бирмера.
буемых размеров. При равномерных тонких маз- Определение количества ретикулоцитов мо-
ках, в которых эритроциты расположены в один жет быть использовано для определения про-
ряд, подбирают такое поле зрения, в котором дукции эритропоэза и вычисления срока жизни
имеется, например, 50 эритроцитов, и затем про- эритроцитов.
считывают 20 таких полей зрения.
Л и т е р а т у р а . Гомзякова Н. В. Лаб, дело,
При отсутствии готового окуляра его можно
1960, № 5, с. 38—39; Зубжицкий Ю. Н. Лаб.
легко приготовить, для чего отвинчивают окуляр
дело; 1967, № 2, с. 35; Кориков П. Н. Лаб. дело,
7Х, вкладывают в него кусок бумаги с выре-
1961, № 4, с. 10.
занным небольшим квадратиком и завинчивают.
Количество подсчитанных ретикулоцитов выра-
жают на 1000 или на 100 эритроцитов.
Подсч|ет количества ретикулоцнтов при по-
3.3.7. Резистентность эритроцитов
мощи люминесцентной микроскопии. П р и н -
ц и п . Использование способности субстанции
ретикулоцитов флюоресцировать после обра- Для оценки физико-химических свойств эрит-
ботки крови акридиновым оранжевым. роцитов исследуют стойкость (резистентность)
Р е а к т и в ы . 1. Раствор акридинового эритроцитов к различным воздействиям. Наи-
оранжевого на изотоническом растворе хлорида большее распространение в клинической прак-
натрия и концентрации 1 : 5000. Для приготов- тике получило исследование осмотической ре-
ления изотонического раствора рекомендуют ис- зистентности эритроцитов.
пользовать дистиллированную воду рН 5,8—6,8, Унифицированный метод определения осмо-
Раствор акридинового оранжевого должен быть тической резистентностн эритроцитов в модифи-
свежим; хранят его не более 3—5 дней в темном кации Л. И. Идельсона (1974). П р и н ц и п .
флаконе с притертой пробкой. 2. Нефлюоресци- Количественное определение степени гемолиза
рующее иммерсионное масло. Можно использо- эритроцитов в забуферных гипотонических раст-
вать афлуоль или обычное иммерсионное масло ворах хлорида натрия.
с флюоресценцией, погашенной нитробензолом Р е а к т и в ы . Основной раствор (по своей
(0,3 мл нитробензола на 1 мл масла). Ю. Н. Зуб- осмотической концентрации соответствует 10 %
жицкий в качестве нефлюоресцирующего масла раствору хлорида натрия) имеет рН 7,4, состав
предлагает использовать перегнанный анизол. раствора: двузамещенный фосфат натрия
Специальное оборудование.
Микроскоп ультрафиолетовый МУФ-ЗМ или лю-
минесцентный.
Х о д о п р е д е л е н и я . Кровь смешивают с 180 г, дистиллированная вода — до 2 л. Раствор
акридиновым оранжевым в пробирке или смеси- можно хранить в закрытой посуде в холодиль-
теле в соотношении 1 часть крови и 10 частей нике в течение нескольких месяцев.
краски (смесь можно хранить не более 5 ч). Основной раствор разводят в 10 раз и полу-
Смесь перемешивают в течение 2 мин, каплю чают раствор, соответствующий по своей осмо-
смеси наносят на предметное стекло и накрыва- тической концентрации 1 % раствору хлорида
ют покровным стеклом. Микроскопируют с по- натрия. Из этого раствора готовят рабочие раст-
мощью светофильтра ЖС-17. В препарате воры хлорида натрия следующих концентраций:
эритроциты не флюоресцируют, а в ретикулоци- 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40;
тах зернисто-нитчатая субстанция светится 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%. Можно приготовить
ярко-красным цветом. Замечено, что в крови, по 100 мл этих рабочих растворов и сохранять
стабилизированной гепарином или цитратом их в холодильнике. Годны в течение 2 нед.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1.
натрия, флюоресценции ретикулоцитов не на-
Фотоэлектроколориметр. 2. Термостат на 37 "С.
блюдается. Метод отличается простотой и тре-

119
Х о д о п р е д е л е н и я . В две стерильные тивности ферментов в эритроцитах. В эритро-
пробирки с предварительно внесенными 2 кап- цитах содержатся ферменты гликолиза, пенто-
лями гепарина берут по 1,5 мл крови, перемеши- зофосфатного цикла, системы глютатиона, аде-
вают и одну используют для исследования, вто- ниловой системы и других реакций обмена, бло-
рую — оставляют на сутки в термостате. В ряд када которых может быть связана с дефицитом
ферментов.
центрифужных пробирок (14 штук) разливают
по 5 мл рабочих растворов хлорида натрия кон- Наиболее распространенной наследственной
центраций от 1 до0,10 %. В каждую центрифуж- ферментопатией эритроцитов является дефицит
ную пробирку добавляют по 0,02 мл перемешан- глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФД), от-
кой гепаринизнрованной крови и оставляют при носящейся к ферменту пентозофосфатного цик-
комнатной температуре на 30 мин. Центрифуги- ла. Для диагностики дефицита Г-6-ФД наиболее
руют смесь крови с растворами хлорида натрия достоверным является количественное опреде-
при 2000 об/мин в течение 5 мин. Из каждой ление активности ферментов в эритроцитах. В
пробирки сливают надосадочную жидкость и из- условиях практической работы могут быть вы-
меряют на фотоэлектроколориметре при длине полнены качественные пробы, имеющие ориен-
волны 500—56O нм (зеленый светофильтр) в кю- тировочное значение.
вете с толщиной слоя 10 мм против холостой Тест на образование телец Гейнца—Эрлиха
пробы. по Дейчи. П р и н ц и п . Инкубация эритроци-
Холостая проба — надосадочная жидкость тов с метиловым фиолетовым и появлением окра-
в пробирке, содержащей 1 % раствор хлорида шенных телец в большом количестве в патоло-
гических эритроцитах.
натрия.
Р а с ч е т . За 100% гемолиз принимают Р е а к т и в ы . 0,5 % раствор метилового
гемолиз в пробирке, содержащей 0,1 % раствор фиолетового в изотоническом растворе хлорида
хлорида натрия. Вычисляют процент гемолиза в натрия.
каждой пробирке, сравнивая величины экстинк- Специальное оборудование.
ции надосадочной жидкости с экстинкцией, при- Микроскоп.
нятой за 100 %, по формуле: Х о д о п р е д е л е н и я . Смешивают в про-
бирке равные количества крови н раствора ме-
тилового фиолетового. Тщательно перемеши-
вают и оставляют на 10 мин. Готовят мазки
на предметном стекле, накрывают покровным
и микроскопируют с иммерсионным объективом.
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро-
цент гемолиза в пробирке с 0,1 % раствором хло- вых наблюдается образование в эритроцитах
рида натрия. единичных красного цвета телец.
На следующий день повторяют исследование К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . В патоло-
с кровью, инкубированной 24 ч при 37 °С. гических Г-6-ФД-дефицитных эритроцитах по-
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро- является большее количество телец (4—6). Про-
вых в свежей крови начало гемолиза отмечают ба не является специфичной для дефицита
при концентрации хлорида натрия 0,50—0,45 %, Г-6-ФД, так как тельца Гейнца появляются при
а полный гемолиз — при 0,40—0,35 % растворе передозировке сульфаниламидов, при отравле-
нии анилиновыми красителями, при дефиците
хлорида натрия.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Исследо- других ферментов (глютатион-редуктазы, 6-фос-
вание проводят при подозрении на гемолити- фоглюкоиатдегидрогеназы), у носителей неста-
ческую анемию. Понижение осмотической ре- бильных гемоглобинов.
зистентности, т. е. появление гемолиза эритроци- Качественный метод Мотульского—Кемп-
тов при более высокой, чем в норме, концентра- беля. П р и н ц и п . В присутствии Г-6-ФД об-
разуется NADPH, который обесцвечивает брил-
ции хлорида натрия (0,70—0,75 %), наблюда-
лиантовый крезиловый синий.
ется при наследственном мнкросфероцитозе и
Р е а к т и в ы . 1, Раствор натриевой солн
некоторых наследственных несфероцитарных ге-
глюкозо-6-фосфата (825 мг в 100 мл дистилли-
молитических анемиях, а также иногда при ауто-
иммунной гемолитической анемии. В ряде случа- рованной воды). 2. Раствор NADP (50 мг в
ев понижение осмотической резистентности вы- 100 мл дистиллированной воды). 3. Раствор
является только при исследовании инкубирован- бриллиантового крезилового синего (32 мг в
ной крови. Повышение осмотической резистент- 100 мл дистиллированной воды). 4. Трис-буфер-
ности характерно для талассемии, гемоглобино- ная смесь рН 8,5 (8,96 г в 97мл дистиллирован-
патии. ной воды + 3 мл концентрированной НС1). 5. Па-
рафин.
Л и т е р а т у р а , Идельсон Л. И, В кн.:
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Не
Справочник по функциональной диагностике /
требуется.
Под ред. И. А. Кассирского.— М., Медицина,
Х о д о п р е д е л е н и я . В пробирке сме-
1970, с. 401.
шивают: 0,1 мл реактива 1; 0,1 мл реактива 2;
0,25 мл реактива 3; 0,2 мл реактива 4. В другую
3.3.8. Пробы на ферментопатню
пробирку, куда заранее внесен 1 мл дистиллиро-
эритроцитов
ванной воды, добавляют 0,02 мл крови из паль-
При несфероцитарных гемолитических ане- ца. Смешивают содержимое обеих пробирок,
миях возникает необходимость исследования ак- смесь покрывают 1—2 мл жидкого парафина и

120
ставят на водяную баню при 37 °С. Отмечают Сидероциты и сидеробласты — это эритро-
время обесцвечивания смеси. циты и эритробласты (нормобласты), содержа-
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро- щие в цитоплазме негемоглобиновое железо в
вых раствор обесцвечивается черта 40—55 м и н . виде гемосидерина и ферритина.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Замедле- П р и н ц и п . Окраска с помощью реакции
ние обесцвечивания более 90 мин свидетель- на берлинскую лазурь и образование внутри-
ствует о дефиците Г-6-ФД. При гемолитической клеточных гранул синего цвета.
энзимодефицитной анемии обесцвечивание на- Р е а к т и в ы . 1. 2% раствор железисто-
ступает через 3—24 ч. синеродистого калия. 2. 0,1 н. раствор НС1
Качественный метод по Бернштейну. П р и н - (8,2 мл концентрированной НС1 и дистиллиро-
ц и п тот же, что и в методе Мотульского— ванной воды до 1 л). 3. 0,1 % раствор сафрани-
Кемпбеля, но окраска бриллиантовым крезило- на. 4. Метиловый спирт.
вым синим заменена дихлорфенилиндофенолом. Специальное оборудование.
Р е а к т и в ы . 1. Раствор 2,6-дихлорфени- Микроскоп.
линдофенола (14,5 мг на 100 мл буферного Х о д о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки
раствора трис НС1, рН 8,0). Буферный раствор в метиловом спирте 10—20 мин и высушивают
состоит из следующих компонентов: 1,48 М раст- на воздухе. Помещают в смесь равных частей
вор трисоксиметиламинометана (43,27 г на растворов 1 и 2 при температуре 50—56 °С
250 мл воды) и 1,48 М раствор HCI (2 ампулы на 15—20 мин. Промывают в проточной воде
фиксанала, содержащего 0,1 г-экв, доводят во- 10—15 мин и ополаскивают дистиллированной
дой до 135 мл). К 230 мл раствора трис добав- водой. Докрашивают раствором сафранина 3—
ляют 110 мл раствора НС1 и доводят водой до 5 с.
460 мл. 2. Раствор феназинметасульфата (2 мг Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В перифе-
на 100 мл воды). 3. Раствор NADP (2,3 мг в рической крови число сидероцитов не превы-
1 мл воды). 4. Раствор глюкозо-6-фосфата шает 1,1 % и составляет в среднем 0,6 + 0,04%,
(15,2 мг натриевой соли Г-6-Ф в 1 мл воды). в костном мозге их несколько больше—0,9 +
Из этих растворов готовят реактивную смесь + 0,09% (в среднем 0,2—2,1%), количество
следующего состава: реактив 1—8 частей, реак- сидеробластов (ядерных эритроцитов с железо-
тив 2—1 часть, реактив 3—0,5 части и реактив содержащими гранулами) в костном мозге
4—0,5 части. 23,7 + 2,4 %.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Не К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение
требуется. сидероцитов и сидеробластов характерно для
Х о д о п р е д е л е н и я . В пробирку с 1 мл железодефицитных анемий. Повышение железо-
дистиллированной воды вносят 0,02 мл крови содержащих клеток наблюдается при гемолити-
из пальца. После наступления гемолиза добав- ческих анемиях, гипопластических анемиях, по-
ляют 0,5 мл реактивной смеси. Оставляют на сле операции спленэктомии.
15—20 мин при комнатной температуре. Через
Л и т е р а т у р а . Цитологические аспекты
15—20 мин оценивают изменение цвета смеси.
заболеваний системы крови/Под ред. Э. И. Те-
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . Обесцвечи-
рентьевой, Г. И. Козинца.— М.: Медицина,
вание смеси происходит через 15—20 мин.
1978, с. 162.
Клиническое значение. Более
позднее обесцвечивание смеси свидетельствует Фетальный гемоглобин. Метод Ветке.
о дефиците Г-6-ФД в эритроцитах. Неполное П р и н ц и п . Элюция гемоглобина кислотой с
обесцвечивание через 30 мин соответствует докраской мазков дает возможность отличить
уменьшению активности Г-6-ФД, а отсутствие эритроциты, содержащие фетальный гемогло-
обесцвечивания к этому времени свидетель- бин, по сохраненной окраске в отличие от обес-
ствует о резком снижении активности цвеченных эритроцитов, содержащих гемогло-
фермента. бин А.
Р е а к т и в ы . 1 . Цитратно-фосфатный бу-
Л и т е р а т у р а . Тодоров И. Клинические фер (рН 3,2): 24,7 мл 0,2 М раствора Na 2 HPO 4
лабораторные исследования в педиатрии. 5-е (35,6 г Na 2 HPO 4 • 2Н2О и до 1 л дистиллирован-
изд. (русск.) — София, 1966, с. 313, 389; Идель- ной воды) и 75,3 мл 0,1 М раствора лимонной
сон Д. И.,Катоян Э. Р. Лабор. дело, 1970, № 7, кислоты (21,01 г лимонной кислоты и до 1 л ди-
с. 428. стиллированной воды). 2. 1 % раствор метило-
вого фиолетового или 1 % раствор эозина. Луч-
шие результаты дает докраска метиловым фио-
3.3.9. Цитохимические исследования летовым. 3. Этиловый спирт 80 %.
эритроцитов С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1.
Микроскоп. 2. Термостат на 37 °С.
Цитохимические исследования отличаются Х о д о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки
простотой, не требуют специального оборудова- крови в 80 % этиловом спирте 5 мин. Промы-
вают дистиллированной водой и высушивают.
ния и дают ориентировочное представление о ко-
личестве исследуемого вещества. Исследования Погружают мазки на 5 мин в прогретый при
эритроцитов проводят с целью выявления раз- 37 °С в течение 30 мин цитратно-фосфатный
л и ч н ы х внутриклеточных включений, наличия буфер (для элюции гемоглобина), периодически
разных форм гемоглобина, ферментных нару- помешивая раствор стеклянной палочкой для
шений. удаления пузырьков воздуха. Ополаскивают
121
мазки дистиллированной водой, высушивают н и й — эритроциты, верхний — плазма). При
фильтровальной бумагой. Докрашивают реакти- этом СОЭ, т. е. величина столбика плазмы, бы-
вом 2 в течение 2—3 мин. Промывают дистил- вает р а з л и ч н о й в зависимости от изменений
лированной водой и высушивают. физико-химических свойств крови.
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У взрослых Р е а к т и в ы. 5 % раствор трехзамещенного
встречаются единичные окрашенные эритроциты цитрата натрия (C 6 H 5 O7Na 3 • 5Н 2 О). Раствор
(содержащие гемоглобин F); увеличение числа фильтруют (рН должен быть нейтральным или
окрашенных эритроцитов наблюдается у ново- слабощелочным). При помутнении реактив него-
рожденных и детей до 5-месячного возраста. ден.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Увеличе- С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Ап-
ние числа эритроцитов с гемоглобином F наблю- парат Панченкова, состоящий из штатива и
дается у больных талассемией, особенно п р и капилляров. Пробирки и капилляры должны
гомозиготной форме. быть химически чистыми, т. е. необходимо их
промыть хромовой смесью, многократно после
Л и т е р а т у р а . Исаева Е. Г., Короле-
этого вымыть водопроводной водой и 2—3 ра-
ва А. М. Лаб. дело, 1965, № 4, с. 201; Betke R.,
за — дистиллированной.
Kleinhauer E. B l u t , 1958, Bd 5, S. 241.
Х о д о п р е д е л е н и я . Перед использова-
Активность Г-6-ФД (К.Ф.1.1.1.49). П р и н - нием химически чистый к а п и л л я р промывают
ц и п . Окисление глюкозо-6-фосфата в присут- цитратом натрия и заполняют им пробирку на
ствии Г-6-ФД при участии NADP, который 1/4 (до метки 0,75).
восстанавливается в N A D P - H ; под влиянием Кровь из мякоти пальца (или венозную)
последнего тетразолий выявляется в виде гра- набирают полный к а п и л л я р (до метки 0) и пере-
нул формазана. носят в пробирку с цитратом (усиленно выдувая
Р е а к т и в ы . 1 . 10% раствор формалина. всю кровь). При этом получают соотношение
2. Инкубационная среда: глюкозо-6-фосфат — крови и цитрата 4 : 1 . Можно брать вдвое боль-
3 мг в 1 мл, NADP — 1 мг в 1 мл, магния шее количество цитрата и крови, т. е. половину
хлорид — 0,1 М в 0,2 мл, нитросиний тетразо- капилляра цитрата (до метки 0,5) и два полных
лий — 1 мг в 1 мл, трис-буфер 0,25 М (рН 7,6) — капилляра крови. Перемешивают содержимое
2,3 мл, феназин-метасульфат — 0,5 мл. пробирки и набирают до метки 0 смесь крови
Специальное оборудование. с цитратом. Закрыв пальцем верхний конец
1. Термостат на 37 °С. 2. Микроскоп. капилляра, осторожно, чтобы кровь из капил-
Х о д и с с л е д о в а н и я . Н а нефиксиро- л я р а не вылилась, устанавливают капилляр в
ванные мазки крови наносят 0,1—0,2 мл инку- штатив строго вертикально, у п и р а я н и ж н и й его
бационной среды и помещают мазки в гори- конец в резиновую прокладку и п р и ж и м а я верх-
зонтальном положении в термостат на 1 ч ний конец прокладкой или пробкой. Через час
15 мин. Фиксируют в 10 % растворе формалина отмечают скорость оседания эритроцитов по вы-
10 мин при комнатной температуре. Высушива- соте отстоявшегося слоя плазмы в миллиметрах.
ют на воздухе и микроскопируют. Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У мужчин
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В эритро- 1 —10 м м / ч , у женщин 2—15 мм/ч.
цитах обнаруживают 10—20 гранул формазана. При снижении температуры (<20°С) поме-
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение щения, в котором проводится исследование,
числа гранул формазана в эритроцитах или их СОЭ замедляется, при повышении — увеличи-
отсутствие указывает на дефицит Г-6-ФД. вается.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Увеличе-
ние СОЭ наблюдается при различных воспали-
3.3.10. Скорость оседания тельных процессах, интоксикациях, острых и
эритроцитов (СОЭ). хронических инфекциях, при инфаркте миокар-
да, опухолях, после кровопотери, оперативных
Исследование СОЭ является одним из самых вмешательств. Особенно выраженное ускорение
распространенных в лабораторной практике и СОЭ (60—80 м м / ч ) характерно для парапроте-
входит в состав общего клинического анализа инемических гемобластозов (миеломная бо-
крови. Кроме того, нередко проводится одновре- лезнь, болезнь Вальденстрема и др.) и симпто-
менно с определением концентрации гемоглоби- матических парапротеинемий, сопутствующих
на и количества лейкоцитов в крови при про- злокачественным новообразованиям, хрониче-
филактических осмотрах. скому активному гепатиту, циррозу печени, ту-
Унифицированный микрометод Панченкова беркулезу, амилоидозу, коллагенозам. Замед-
(1972). П р и н ц и п . Смесь крови с цитратом ление СОЭ наблюдается при эритремии и с и м п -
при стоянии разделяется на два слоя (ниж- томатических эритроцитозах.

3.4. Л Е Й К О Ц И Т Ы

Лейкоциты — клетки крови, отличающиеся и структуре ядра, характеру цитоплазмы, ее
характерной структурой и сложным внутрикле- г р а н у л я ц и и , ядерно-цитоплазматического соот-
точным метаболизмом. Различные формы зре- ношения, тинкториальным свойствам; эти приз-
лых лейкоцитов являются объектом лаборатор- наки являются основными критериями при иссле-
ных исследований. Они различаются по форме довании лейкоцитов в окрашенных мазках крови.
122
Лейкоциты — в ы с о к о с п е ц и а л и з и р о в а н н ы е кровь). Кончик пипетки вытирают фильтроваль-
клетки, обладающие различными защитными ной бумагой или марлей, следя за тем, чтобы
функциями. Благодаря фагоцитарной активно- из пипетки кровь не вылилась. Выдувают кровь
сти, участию в клеточном и гуморальном и м м у - из пипетки на дно пробирки, тщательно переме-
нитете, обмене гистамина, гепарина, реализу- шивают (повторно набирая и выдувая смесь
ются антимикробные, антитоксические, антите- крови с уксусной кислотой). Маркируют про-
лообразующие и другие важнейшие компоненты бирку и оставляют до момента счета (допуска-
иммунологических реакций. ется счет лейкоцитов не более чем через 2—4 ч
Количество лейкоцитов в крови изменяется после взятия крови).
под влиянием различных внешних факторов: Подготавливают счетную камеру: протирают
сезонных, климатических, метеорологических, насухо камеру с сеткой и покровное стекло,
периодов солнечной активности, а также при затем притирают стекло к камере, слегка надав-
разных физиологических состояниях организма ливая его таким образом, чтобы по краям стекла
(возрастные изменения, беременность, фазы появились радужные кольца или полосы (это
менструального цикла и пр.) и разнообразной свидетельствует о высоте камеры — 0,1 м м ) . За-
патологии. полняют счетную камеру разведенной кровью:
Поэтому исследование числа лейкоцитов в предварительно встряхивают несколько раз со-
крови — одно из самых распространенных в ла- держимое пробирки, затем пастеровской пипет-
бораторной практике. Они проводятся не только кой или стеклянной палочкой отбирают каплю
заболевшим (обязательно всем больным в ста- разведенной крови и подносят ее к краю покров-
ционаре и амбулаторным по п о к а з а н и я м ) , но и ного стекла, следя за тем, чтобы кровь без пу-
здоровым при профилактических осмотрах дет- зырьков воздуха равномерно заполнила всю
ского населения, рабочих, и служащих некото- поверхность сетки, не затекая в бороздки. За-
рых производств, диспансеризации и других оз- полненную камеру оставляют в горизонтальном
доровительных мероприятиях. положении на 1 мин (для оседания лейкоцитов).
Не меняя горизонтального положения камеры,
помещают ее на столик микроскопа и подсчиты-
3.4.1. Подсчет количества вают лейкоциты в 100 больших квадратах с ма-
лым увеличением (окуляр 10 X, объектив 8 Х ) .
Подсчет количества лейкоцитов входит в со- Для большей точности счет лейкоцитов проводят
став общего клинического анализа крови, а так- по всей сетке в больших квадратах (неразделен-
же «укороченного» анализа (содержание гемо- ных на малые квадраты и полосы), н а ч и н а я с ле-
глобина, число лейкоцитов, СОЭ), иногда в экст- вого верхнего угла сетки. Для лучшего контрас-
ренных случаях исследуют только количество тирования затемняют поле зрения, опуская кон-
лейкоцитов (при подозрении на острый воспали- денсор и закрывая диафрагму. Считают клетки,
тельный процесс и др.). расположенные внутри квадрата и лежащие на
Унифицированный метод подсчета в автома- любых двух линиях (чтобы дважды не подсчи-
тическом счетчике (1972). П р и н ц и п . Боль- тать одну клетку).
шинство счетчиков основано на кондуктометри- Расчет числа лейкоцитов проводят, исходя из
ческом методе. Клетки, находящиеся в растворе разведения крови (20), числа сосчитанных квад-
электролита, пропущенные через электрическое ратов (100) и объема одного большого квадрата
поле, изменяют сопротивление электрической це-
пи. Возникший импульс регистрируется счетным ( мкл, так как сторона квадрата — мм,
250 о
устройством с цифровой индикацией.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Ав-
томатический счетчик.
Реактивы и ход о п р е д е л е н и я
соответствуют инструкции, приложенной к при-
бору.
Унифицированный метод подсчета в счетной где X — число лейкоцитов в 1 мкл крови; а —
камере (1972). П р и н ц и п . Подсчет лейкоци- число лейкоцитов в 100 больших квадратах.
тов под микроскопом в определенном количестве Практически количество сосчитанных лейко-
квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл цитов умножают на 50.
крови (или 1 л по системе СИ), исходя из объема Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . Количество
квадратов и разведения крови. лейкоцитов в крови колеблется в пределах
Р е а к т и в ы . 3—5 % раствор уксусной кис- 4000—8800 в 1 мкл, или 4- 109—8,8- 109 в 1 л
лоты, подкрашенный несколькими к а п л я м и раст- (по системе СИ). Число лейкоцитов в крови —
вора метиленового синего (для окраски ядер наиболее вариабельный лабораторный показа-
лейкоцитов). Раствор голубого цвета, длительно тель. Оно может изменяться в течение дня,
годен к употреблению. в связи с приемом пищи, после физической на-
Специальное оборудование. грузки, под влиянием различных диагностичес-
1. Микроскоп. 2. Счетная камера Горяева. ких процедур, медикаментозных воздействий.
Х о д о п р е д е л е н и я . Разводят исследуе- К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Повыше-
мую кровь в 20 раз, для этого в сухую пробирку ние количества лейкоцитов — лейкоцитоз —
наливают 0,4 мл уксусной кислоты. Набирают наблюдается при р а з л и ч н ы х воспалительных
из пальца 0,02 мл крови (можно использовать процессах, острых бактериальных инфекциях,
стабилизированную антикоагулянтом венозную интоксикациях, шоке, острых кровопотерях, ко-
123
матозных состояниях, гемолитическом кризе, ном крае мазка, меняют положение стекла и дру-
почечной колике, аллергических реакциях, опу- гую половину клеток считают на противопо-
холях. Резкое увеличение количества лейкоци- ложном крае.
9 9
тов в крови (50- 10 /л — 100- 10 /л и более) При исследовании лейкоцитарной формулы
характерно для развернутой стадии хроничес- необходимо дифференцировать неразрушенные
кого миелолейкоза и хронического лимфолей- лейкоциты. Если при подсчете 100 лейкоцитов
коза. отмечаются какие-либо отклонения от нормы
Снижение количества лейкоцитов — лейко- ( н а п р и м е р , увеличение числа палочкоядерных
пения — наблюдается при вирусных инфекциях, форм, эозинофилов, лимфоцитов или появление
некоторых хронических инфекциях, сепсисе, лейкоцитов, не обнаруживаемых у здоровых
циррозе печени, хроническом активном гепатите, людей), необходимо подсчитать еще 100 лей-
аутоиммунных заболеваниях, после приема ци- коцитов и вывести средний результат. В табл. 25
тостатических препаратов, антибиотиков, суль- представлены основные морфологические осо-
фаниламидов и других медикаментов. Особенно бенности различных лейкоцитов.
резкая лейкопения (2- 10 9 /л и менее) наблюда- Исследование лейкоцитарной формулы с по-
ется п р и апластической анемии, агранулоцитозе, мощью автомата. Современные гематологи-
после лучевых воздействий. ческие автоматы для подсчета лейкоцитарной
формулы основаны на двух принципах.
Л и т е р а т у р а . Грибова И. А. Гематоло- П р и н ц и п 1 . Дифференцировка лейкоци-
гическая норма.— В кн.: Руководство по гема- тов с помощью микроскопа в окрашенных маз-
тологии/Под ред. А. И. -Воробьева, Ю. И. Ло- ках крови путем сравнения морфологических
рие. М.: М е д и ц и н а , 1979, с. 53. характеристик клеток крови со стандартными,
х р а н я щ и м и с я в памяти компьютера (автомат
3.4.2. Лейкоцитарная формула « H e m a t r a k » фирмы «Opton», ФРГ, и др.).
П р и н ц и п 2 . Дифференцировка лейкоци-
Лейкоцитарную формулу (процентное соот- тов не в мазках, а в цельной крови в зависи-
ношение р а з л и ч н ы х видов лейкоцитов) подсчи- мости от размера и цитохимических свойств
тывают в окрашенных мазках крови. Методы клеток с применением селективных окрасок (ав-
фиксации и окраски мазков крови, а также томат «Hemalog D» фирмы «Technicon», США).
микроскопического исследования мазков унифи- С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Ав-
цированы. томат для подсчета лейкоцитарной фбрмулы.
Унифицированный метод морфологического Х о д и с с л е д о в а н и я соответствует ин-
исследования форменных элементов крови с струкции, приложенной к автомату.
дифференциальным подсчетом лейкоцитарной Существующие автоматы для подсчета
формулы (1979). П р и н ц и п . Микроскопия лейкоцитарной формулы отличаются не только
сухих фиксированных и окрашенных мазков принципом работы, но и количеством дифферен-
крови с дифференцированием различных форм цируемых лейкоцитов в 1 пробе, по возможности
лейкоцитов. Этапы исследования, включающие и д е н т и ф и к а ц и и патологических форм, н а л и ч и -
приготовление мазков крови, подготовку пред- ем контрольного устройства, устройства для
метных стекол, фиксацию мазков и их окраску, приготовления мазков и их окраски и пр.
изложены в разделе 3.3.2. Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В табл. 2 5
Р е а к т и в ы . 1. Иммерсионное масло. 2. Ди- представлены процентные и абсолютные значе-
этиловый эфир. ния различных лейкоцитов и их морфологичес-
Специальное оборудование. кие особенности у здоровых людей.
1. Микроскоп. 2. 11-Клавишный счетчик для К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Изменения
подсчета лейкоцитарной формулы. лейкоцитарной формулы сопутствуют многим
Ход исследования. С помощью заболеваниям и нередко являются неспецифиче-
объектива 10 X (малого увеличения) находят скими. Тем не менее диагностическое значение
край мазка крови. Наносят каплю иммерсион- этого исследования велико, оно дает представле-
ного масла и, не меняя положения стекла, пере- ние о тяжести состояния, эффективности тера-
водят иммерсионный объектив (90 X) таким пии. При гемобластозах исследование лейкоци-
образом, чтобы он погрузился в каплю масла. тарной формулы особенно диагностически зна-
Подбирают с помощью микровинта соответству- чимо. Обнаружение в крови властных клеток
ющее фокусное расстояние, устанавливая чет- (см. 3.6) является опорным пунктом для диагно-
кую видимость клеток. Приступают к дифферен- за острого лейкоза.
цированию лейкоцитов, отмечают клетки с помо- Повышение числа нейтрофилов — нейтрофи-
щью 1 1-клавишного счетчика; необходимо про- лез, как правило, сочетается с увеличением об-
считать не менее 100 лейкоцитов. Подсчет лей- щего числа лейкоцитов в крови и наблюдается
коцитов проводят, соблюдая следующее прави- при острых воспалительных процессах, интокси-
ло: отступив 2—3 поля зрения от края мазка, кациях, шоковых состояниях, при кровотече-
затем 3—5 полей зрения вдоль края мазка, за- ниях, инфаркте миокарда, гемолитическом кри-
тем 3—5 полей зрения под прямым углом по на- зе. Нередко этим состояниям сопутствует и повы-
правлению к середине мазка, снова 3—5 полей шение числа палочкоядерных нейтрофилов, и по-
зрения параллельно краю, затем под п р я м ы м явление незрелых гранулоцитов (миелоциты, ме-
углом по направлению к краю и т. д.; таким об- тамиелоциты) в небольшом количестве (сдвиг
разом, стекло двигают по зигзагу (линия «меан- формулы влево). Максимальной степени эти из-
дра»). Просчитав около половины клеток на од- менения достигают при миелопролиферативных

124
ц а 25. Характеристика различных видов лейкоцитов здоровых людей
Нейтрофилы
Эозинофилы Базофилы Лимфоциты Моноциты
Вид
палочкоядерные сегментоядерные

Количество
47—72
1—6 0—1
0,5—5 19—37 3—11
в%
40—300
в 1 мкл 2000—5500 20—300 0—65 1200—3000 90—600
10—15 10—15 8—12 8—10
Размер 15—20
12—15
клетки, мкм
Ядро: форма Узкое, вытяну- Узкое, состо- Несколько Неопреде- Округлое Полиморф-
и л и бобо-
тое в виде па- ит из 3 — 5 сег- шире, чем у ное: округ-
ленное,
ментов
лочки нейтрофи- иногда в видное лое, бобо-
ла, состоит виде листа видное, с
из 2—3 сег- растения вдавления-
ми
ментов
Неравномер- Неравномер-
структура Неравно- Неравно-
Неравно- Равно-
ная крупно- мерная мерная мерная
ная крупно- мерная
глыбчатая глыбчатая крупно- крупно- сетчатая
крупно-
глыбчатая
глыбчатая глыбчатая
окраска Темно-фиоле- Темно-фиоле- Фиолетовая Фиолетовая
Темно- Светло-
товая товая фиолетовая фиолетовая
Розоватая Розоватая Бледно-
Цитоплазма Бледно-ро- В виде узко- Обильная
розовая зоватая не- го ободка бледно-го-
редко с раз- иногда ши- лубая или
мытыми рокая зона сероватая
голубая
участками
(растворен-
ные грану-
лы)
Зернистость, Обильная, мел- Обильная, мел- Обильная, Необиль- Изредка Непостоян-
ее окраска. кая, бледно - кая, бледно- ная, нерав- единичные но, иногда
занимает
фиолетовая
фиолетовая всю цито- номерная, фиолетовые мелкая
характер
плазму, фиолетовая гранулы бледно-
крупная, фиолетовая
розовая




заболеваниях, особенно хроническом миелолей- вместе с эозинофилией может быть признаком
козе. При этом резко увеличивается общее коли- миелопролиферативного заболевания.
чество лейкоцитов (50- 10;9/л — 100 • 10 9 /л и бо- Увеличение числа лимфоцитов — лимфоци-
лее) и в значительном проценте в лейкоцитарной тоз — наблюдается при инфекционном лимфо-
формуле обнаруживают промиелоциты (3— цитозе, коклюше, туберкулезе, после удаления
5%), миелоциты (до 10%), метамиелоциты селезенки. Наибольшей степени лимфоцитоз до-
(до 10—15 %) и единичные властные клетки, стигает п р и хроническом лимфолейкозе (70—
при этом число зрелых нейтрофилов существен- 90 %) и сочетается с высоким лейкоцитозом
(50-10 9 /л и выше). Относительный лимфоци-
но уменьшается. Такого типа изменения могут
быть и реактивными (лейкемоидные р е а к ц и и ) , тоз — явление нередкое и наблюдается во всех
и сопутствовать сепсису, туберкулезу, метаста- случаях лейкопении с нейтропенией. Увеличе-
зам злокачественных опухолей в костный мозг. ние числа моноцитов — моноцитоз — обнару-
живается при хронических инфекциях, опухо-
Снижение числа нейтрофилов — нейтропе-
ния — обычно сочетается с лейкопенией и на- лях и особенно резкое — при хронических моно-
цитарных лейкозах.
блюдается при вирусных инфекциях, некоторых
хронических инфекциях, после приема различ- Л и т е р а т у р а . Золотницкая Р. П. Лаб.
ных медикаментов (особенно цитостатических),
дело., 1983, № 5, с. 36—38.
после лучевой терапии. Максимальная степень
нейтропении наблюдается при апластической 3.4.3. Лейкоконцентрат
анемии, агранулоцитозе.
Увеличение числа эозинофилов — эозинофи- Приготовление и исследование лейкокон-
лия — сопутствует аллергическим реакциям, центрата проводят в случаях выраженных лей--
глистной инвазии, некоторым детским инфек- копений, когда исследование лейкоцитарной
циям, особенно скарлатине, иногда опухолям, формулы затруднено, а также для обнаружения
лимфогранулематозу и др. Увеличение числа патологических элементов, не выявляемых в
базофилов — базофилия — встречается редко и м а з к а х крови (например, при алейкемической
125
стадии острых лейкозов, при лимфогранулема- ±0,1 %, сегментоядерные 58,8 ±0,7 %, эози-
тозе, миеломной болезни и др.). Лейкоконцент- нофилы 1,8±0,05%, базофилы 0,7 + 0,08%,
рацию можно проводить при неотчетливых ре- лимфоциты 31,2±1 %, моноциты 7,1 ±0,3%,
зультатах стернальной п у н к ц и и . Все существу- плазматические клетки 0,2 ±0,03 %. У одного
ющие методы лейкоконцентрации основаны на человека обнаружено 0,2 % миелоцитов, у 2—
следующем: 1) гемолиз, 2) центрифугирование 0,2 и 0,4 % метамиелоцитов, у 2— единичные
и 3) седиментация. фрагменты ядер мегакариобластов.
Наиболее физиологичны методы, основанные К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Исследо-
на седиментации форменных элементов крови, вание мазков лейкоконцентрата имеет сущест-
они наиболее распространены. венные преимущества перед исследованием маз-
Метод с трилоном Б. П р и н ц и п . В связи ков периферической крови п р и острых лейкозах,
с р а з л и ч н ы м удельным весом эритроцитов и лей- особенно при лейкопенических формах. Это ис-
коцитов и добавлением трилона Б, ускоряющего следование дает возможность выявить властные
осаждение эритроцитов, получают плазму, со- клетки, оценить полноту ремиссии при остром
держащую большое количество лейкоцитов. лейкозе, а также провести цитохимические ис-
Р е а к т и в ы . 1. 3% раствор трилона Б. следования, имеющие важное диагностическое
2. Краска Романовского — Гимзы или азур- значение при острых лейкозах (см. 3.6).
эозина. 3. Метанол для фиксации мазков. Выявление в мазках лейкоконцентрата ядер
Специальное оборудование. мегакариоцитов наблюдается при миелопроли-
1. Микроскоп. 2. Термостат на 37 °С. 3. Центри- феративных заболеваниях, особенно доброка-
чественном сублейкемическом миелозе, а также
фуга.
Х о д о п р е д е л е н и я . В пробирку с 1 мл при опухолях различной локализации. Увеличе-
ние плазматических клеток может быть при
3 % раствора трилона Б вносят 4 мл венозной
крови и осторожно перемешивают. Ставят смесь лимфогранулематозе, миеломной болезни и дру-
крови с трилоном в термостат (можно отстаи- гих опухолях. При лимфогранулематозе могут
вать и при комнатной температуре) на 30— быть найдены предстадии клеток Березовско-
45 мин (за это время над эритроцитами образу- го — Штернберга.
ется 2—3 мл прозрачной плазмы). С помощью
Л и т е р а т у р а . Поспелова Р. А. Лейко-
пастеровской пипетки отсасывают в центрифуж-
концентрация в клинической практике.— М.,
ную пробирку слой плазмы, стараясь не захва-

<<

стр. 6
(всего 20)

СОДЕРЖАНИЕ

>>